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上海哈灵生物科技有限公司
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公司信息
植物组织膜性囊泡（RSOV 和 IOV）制备试剂盒产品说明书
2024-12-19 阅读(64)
一、主要用途
上海哈灵生物植物组织膜性囊泡（RSOV 和 IOV）制备试剂是一种旨在通过差速离心技术从植物组织中分离出各种正常外向膜性囊泡（Right - side out；RSOV）和内侧外翻膜性囊泡（In - side out；IOV）组分的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明。其适合于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）、胚胎叶（cotyledon）、上胚轴（epicotyl）等膜性囊泡的制备。其制备物产量高，可用于膜通道、信号传导机制、膜蛋白分布等研究。产品不含污染性蛋白酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度俱佳。
二、技术背景
上海哈灵生物膜性囊泡（membrane vesicle）分成正常外向膜性囊泡（Right - side out；RSOV）和内侧外翻膜性囊泡（In - side out；IOV）。正常外向膜性囊泡是通过去除细胞浆内容物，使之失去内在的代谢系统，同时保持质膜的原始位相，有利于提供适合的底物，不会受到降解和代谢，建立动力机制，进行转运或摄入研究，例如微粒体组分用于 V 型 ATP 酶研究、线粒体组分用于 F 型 ATP 酶研究。而内侧外翻膜性囊泡是通过裂解细胞和细胞器后，质膜重新闭合形成内侧面外翻的囊泡状结构，广泛用于原发性转运系统的研究。
三、产品内容
清理液（Reagent A）：[X] 毫升
平衡液（Reagent B）：[X] 毫升
保存液（Reagent C）：[X] 毫升
产品说明书：1 份
四、保存方式
保存保存液（Reagent C）在－20℃冰箱里。
其余的保存在 4℃冰箱里；有效保证 6 月。
五、用户自备
15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器。
1.5 毫升离心管：用于样品操作和保存的容器。
4℃超速离心机：用于分离膜性囊泡。
DOUNCE 匀浆器：用于裂解组织。
六、实验步骤
（一）正常外向膜性囊泡分离（线粒体和微粒体）
准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定 1 克组织重量。
（选择步骤）放进预冷的 15 毫升锥形离心管。
（选择步骤）加入 xx 毫升清理液（Reagent A）清洗 1 次。
移入一个液氮冻存管。
即刻放入液氮罐过夜。
次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融）。
放进一个 15 毫升锥形离心管。
加入 xx 毫升预冷的平衡液（Reagent B）。
涡旋震荡 5 秒，充分混匀。
即刻放入预冷的 DOUNCE 匀浆器。
在冰槽里用研磨棒匀化组织（约 80 下）。
将所有组织匀浆物移入 15 毫升锥形离心管。
放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g。
小心移出上清液到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管。
放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 10000g。
小心移出上清液到 2 个新的 1.5 毫升离心管，同时保留沉淀颗粒。
加入 xx 微升保存液（Reagent C）到沉淀颗粒管――
将含有上清液的 2 个 1.5 毫升离心管放进 4℃超速离心机离心 60 分钟，速度为 100000g。
小心抽去上清液。
分别加入 xx 微升保存液（Reagent C）――
移取 10 微升进行蛋白质定量测定（注意：建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）。
即刻放进－70℃冰箱里保存。
（二）内侧外翻膜性囊泡分离（质膜分离）
准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定 1 克组织重量。
（选择步骤）放进预冷的 15 毫升锥形离心管。
（选择步骤）加入 xx 毫升清理液（Reagent A）清洗 1 次。
移入一个液氮冻存管。
即刻放入液氮罐过夜。
次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融）。
放进一个 15 毫升锥形离心管。
加入 xx 毫升预冷的平衡液（Reagent B）。
涡旋震荡 5 秒，充分混匀。
即刻放入预冷的 DOUNCE 匀浆器。
在冰槽里用研磨棒匀化组织（约 80 下）。
将所有组织匀浆物移入 15 毫升锥形离心管。
放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g。
小心移出上清液到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管。
放进 4℃台式离心机离心 30 分钟，速度为 10000g。
小心抽去上清液。
加入 xx 微升保存液（Reagent C）――
连续－70℃至 37℃冻融 4 次――
移取 10 微升进行蛋白质定量测定（注意：建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）。
即刻放进－70℃冰箱里保存。
（选择步骤）进行 IOV 组分纯化（建议使用 IOV 膜性囊泡高质纯化试剂盒－10170）。
七、注意事项
本产品为 20 次（1 克植物组织）操作。
所有操作均须在 4℃或以下状态进行。
建议使用足够的样品量。
通常 1 克植物组织的微粒体组分含量为 50 毫克蛋白，线粒体组分含量 5 毫克蛋白，100 毫克质膜。
质膜 IOV 组分为粗提分离产物，其中含有 RSOV 和未予闭合的质膜不等，如果需要获得 95％以上的高纯度的 IOV，建议使用 IOV 膜性囊泡高质纯化试剂盒－10170。
纯化的样品避免反复冻融。
本公司提供系列离子膜通道转运功能（transport/uptake）分析试剂产品。
八、质量标准
本产品经鉴定性能稳定。
本产品经鉴定分离组分维持正常活性。
本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶。
