 |
上海哈灵生物科技有限公司
主营产品： ELISA代测服务,ELISA试剂盒价格,ELISA试剂盒,ELISA试剂盒说明书,大鼠ELISA试剂盒 |
联系电话
18918128223
公司信息
解读：斐林试剂如何用比色法测还原糖，步骤是什么?
2013-9-2 阅读(5394)
斐林试剂来源
斐林试剂是德国化学家斐林（赫尔曼von斐林，1812——1885）在1849发明的。它是用氢氧化钠和硫酸铜溶液0.1克/毫升0.05克/毫升的含量和浓度，酒石酸钾钠制备的内容，其实质是一种新的氢氧化铜的制备。还原糖和可溶性（葡萄糖，果糖和麦芽糖）加热的条件下，能产生砖红色氧化亚铜沉淀。因此，林中常用的可溶性还原糖的存在与否，鉴定试剂。注：严格来讲，果糖不醛糖，不应降低，但果糖是非常特殊的，能反映还原（高中化学，果糖不减，严格地说是错的）。
斐林试剂检测还原糖步骤
1.规范曲线的制：各管混合后加塞，于沸水浴中加热15min。取出后自来水冷却，1500rpm离心15min。取上清液，用分光光度计在590nm波长下比色，以蒸馏水作对照，读取吸光度用空白管的吸光度与不一样浓度糖的各管的吸光度之差为横坐标，对应的糖含量为纵坐标，制作规范曲线。
2.样品中还原糖的获取：取新鲜的植物样品洗净、擦干、剪碎，称取10.00g，放入研钵中研磨至糊状，用水洗入250ml容量瓶中。当体积近150ml左右时，加2～3滴甲基红指示剂，如呈赤色，可用0.1mol/L 的NaOH中和至微黄色。若用风干样品，可称取干粉3.00g，先在烧杯顶用少数水湿润，然后用水洗入250ml容量瓶中，如显酸性，可用上法中和。将容量瓶置于80℃的恒温水浴中保温30min，其间摇摆数次，以便将还原糖充沛获取出来。对含蛋白质较多的样品，此间可加10％Pb（Ac）2，除掉蛋白质，至不再发生白色絮状沉积时，加饱满Na2SO4除掉剩余的铅离子。30min后取出冷却，定容至刻度，摇匀后过滤待测。
3. 样品测定：汲取6ml待测液，加4ml斐林试剂，其它操作与规范曲线一样，在590nm波长下读取吸光度。以不含样品的空白管的吸光度减去样品管的吸光度，在规范曲线上查出糖含量.
比色法是什么?
以生成有色化合物的显色反响为根底，经过对比或丈量有色物质溶液色彩深度来断定待测组分含量的办法。比色法作为一种定量剖析的办法，开始于19世纪30～40年代。比色剖析对显色反响的基本要求是：反响应具有较高的灵敏度和挑选性，反响生成的有色化合物的组成安稳且较安稳，它和显色剂的色彩不同较大。挑选恰当的显色反响和操控好适合的反响条件，是比色剖析的要害。
