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elisa实验优化包被的三大条件
2013-9-4 阅读(12400)
一、如何挑选包被抗原
包被抗原可分为天然蛋白，重组蛋白和小分子抗原三类。天然蛋白通过直接吸附净化包装要求，许多杂质抗原的间接方法可以捕获数据包（*和靶抗原反应物质如直接吸附在酶标板，然后通过抗原抗体的固相的特异性反应）。重组蛋白的纯化通常可以直接涂。小分子抗原如肽和一些小分子有机化合物，分子量太小，很难直接吸附在酶标板，通常*和不相关的蛋白质如牛血清白蛋白，耦合，耦合的固相载体上的吸附。
二、如何挑选包被液
一般是一个ph9.6碳酸盐缓冲液，如果包被抗原在碱性条件下不稳定，也可以用pH7.2磷酸盐缓冲溶液。
三、如何选择包被温度
通常在4-8度为2小时通宵或37度的条件下，我们强烈建议4-8温度范围，有利于保持蛋白的活性。选择4层浓度包被固相载体和涂层性能改变物质的*浓度，总蛋白涂层浓度1-5ug／ml，应该明确的涂层的*浓度的特异性抗原的实验测定。
包被后是否需要封闭?封闭体系又应该怎么选?
封闭是否必要，取决于酶联免疫吸附模型和具体实验条件。一般来说，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作清洗*，无闭也可以得到满意的结果。测定及间接的方法，一般的封闭是*的。常见的密封胶0.05% - 0.5%牛血清白蛋白，10%胎牛血清，明胶1%，脱脂奶粉5%，abmart建议使用5%脱脂奶粉，廉价和密封能力，但脱脂奶粉5%只适合短期使用，不要保存，因此使用较少的试剂盒。
