elisa酶联免疫斑点试验优势    

    elisa酶联免疫斑点试验优势可以追溯到1963年，溶血空斑技术，到1983年后的20年，该方法只表现出高灵敏度，操作简便。才开始大显身手的检测。所以，酶联免疫斑点试验法和其他现有技术中，这样做的优点？

    elisa酶联免疫斑点试验约会从1963年起，谁创立杰尼溶血空斑技术（溶血性斑块形成细胞检测， HPF ） ，这种技术可以用来检测和计数单抗体形成细胞。 Czerkinsky如分泌特异性抗体的细胞数在脾细胞中检测到了该方法使用的成熟的单克隆抗体的技术，在1983年，发现高灵敏度的方法是简单的。后来，他们通过这种方法定量分析有丝分裂原刺激的外周血细胞分泌IFN2γ的数量。随后，在单细胞水平的酶联免疫斑点试验法检测分泌其他细胞因子（如IL- 2 ， IL-4， IL - 5 ，IL-10 ，TNF-α和IL-6 ） ，通过设数量。诺思通等用生物素 - 抗生物素蛋白生物扩增方法，提高了该方法的灵敏度，杜林计算机辅助图像分析系统（电脑辅助视频图像分析， CVIA ）酶联免疫斑点试验法TNF2α自动分析的大小和数量，计算和负载抗原肽的目标暴露后的外周血单个核细胞（PBMC） ，在抗原特异的CD8 + T细胞数的细胞，不仅提高了大规模的研究的背景染色的分辨率也使其成为可能。 Vaquerano这样一个数码相机和计算机相结合，开发了类似的点计数系统，每口井的斑点数量大于100时，这种方法是比较客观的，可重复的，节省时间。

    随着elisa酶联免疫斑点试验技术的不断发展，其优势正在逐渐出现，下面将列出一些传统的酶联免疫斑点试验技术等方面的优势相比， 。

    elisa酶联免疫斑点试验分析，可以可视化的单细胞的分泌产物。在这些分析极为敏感的，因为它是直接在捕捉周围的分泌细胞，稀释在表面，或靠近捕获细胞上的受体，或降解前。zui小到1:100细胞体外频率测量精度。这个分辨率已经远远超过了细胞内的细胞因子，采用四聚体染色和酶联免疫吸附测量精度。这样的高灵敏度是至关重要的，因为抗原特异性T细胞在体外是典型的低频率。高产量?细胞分析是可行的。一个相关的实验室团队训练的数百个样本，可测试在几十抗原。只有少数的细胞，可用于通信和其它细胞学分析方法进行了比较。例如， 45毫升的血液是足够的测试600个不同的抗原/肽反应。您可以定义CD4和CD8细胞的免疫因子的目标。这是因为只有少数细胞可以在高产量模式下进行分析。酶联免疫斑点试验法筛选肽库，绘制免疫因子方面是一个理想的工具。用于确定亲和性的抗原特异性T细胞的功能。这zui大可能是50％的肽类药物的刺激。可以用来研究药物处理的细胞，而不分泌过程。如果观察到的净产量减少，你可以判断这种差异减少分泌细胞，每个细胞分泌或减少生产。淋巴细胞酶联免疫斑点试验检测后仍然活着。这使得分析后增值尽可能作进一步的分析，克隆或低温贮存，冷藏后可用于检测人淋巴细胞，而不会失去其功能。前处理和后处理的样品测试并排，可重复的结果。

（1 ）酶联免疫吸附

    通过ELISA的显色反应，在酶标仪测量吸光度，与标准曲线比较来自可溶性蛋白质聚集体。elisa酶联免疫斑点试验的显色反应，还可以通过细胞分泌的可溶性蛋白质，在相应的位置上的斑点出现清晰可辨的，可直接在显微镜下人工计数斑点或通过电脑辅助分析系统进行计数的点，一个点代表一个细胞，蛋白质分泌到细胞中计算出频率。 （一些研究，不仅要测量的量的细胞因子的产生，需要检测该细胞因子分泌细胞频率），因为它是在单细胞水平检测， ELISPOT比ELISA更敏感，从20万至30万个细胞中检测到一种分泌的的蛋白质。捕获抗体具有高亲和力，高特异性，低内毒素单克隆抗体，来刺激研究者激活的细胞，不会影响分泌细胞因子激活。

（2）和法国四聚体（四聚体的）

    近年来一直存在MHC2 Ⅰ类分子肽四聚体的法国。此方法的优点在于快速，直接，敏感和特异的，即使在身体MCTL水平小于1％ ，与MHC2 Ⅰ抗原肽四聚体的方法仍然可以直接测量灵敏度的值是高于LDA的5?10倍。但是，应用程序的技术，有更多的困难：除了合成的分子和稳定的MHCⅠ类的技术困难，但主要缺点是，抗原表位的选择。因为每个反应只能分析一个单一的抗原决定簇，和MHCⅠ类分子结合的各种抗原决定簇，形成CTL应答的能力，但与遗传背景和时间的变化，所以选择正确的抗原决定簇，就显得尤为重要。抗原表位筛选可以通过elisa酶联免疫斑点试验，但对整个肽库扫描不是一件容易的事。当然，利用生物信息学的抗原表位筛选有很大的帮助。同时，研究结果表明，并非所有的四聚体阳性细胞鉴定通过准确的功能，四聚体阳性细胞能分泌酶联免疫斑点试验法是数10倍INF2γ细胞，其中有许多不表现出一种惰性的功能细胞，可能代表了记忆性CTL前体细胞类型。四聚体分析只增加了敏感性分析，同时测定其功能是非常重要的。

（3）与CR51释放试验

    这种方法是更经典的方法中，虽然被CTL识别的抗原多样性的检测是非常有效的，并能准确地示出由CTL表位的确认，但至少半定量的水平，但自发CR51标记的细胞释放率更高，更长的时间是不适合耕种，记下所需的细胞浓度为高，从而带来不便试用此外， CR51释放方法，测得的特性的细胞群体，而不是一个单一的细胞。

（4）和细胞内染色CK

    法相比较elisa酶联免疫斑点试验法，细胞内染色细胞内CK染色， CK （ ICS）的细胞内积累的主要因子染色和流式细胞仪方法多色参数，检测循环抗原特异性T淋巴细胞可行的淋巴细胞的方法，酶联免疫斑点试验法能够检测到所有分泌的CK ECTL 。

应用

    目前，elisa酶联免疫斑点试验法已被用于检测药物，化学品和其他CK复杂的功能和功能等，因此，调节免疫功能的体内效果提供了一个测试的基础。近年来，酶联免疫斑点试验法技术在评价试验的癌症疫苗，免疫监视和免疫学研究被广泛的应用日益增多。

（1）诊断结核感染人类

    zui近的研究发现，酶联免疫斑点试验技术检测结核分枝杆菌和隐性感染者显着。通过检测IFN2γ能指望产生IFN2γ特异性T细胞，作为一种特定的结核分枝杆菌感染的诊断标志物清点人数色斑。应用酶联免疫斑点试验试验具有较高的特异性，敏感性为96 ％，而结核菌素试验敏感性为69％ 。酶联免疫斑点试验法结核杆菌感染更快速，准确地诊断，卡介苗（ BCG ）接种疫苗引起的结核菌素试验阳性相鉴别。

（2）酶联免疫斑点试验技术在抗癌疫苗研究中的应用

    elisa酶联免疫斑点试验法技术来监测疗效的疫苗已用于分析和评估病人从感染的PBMC （外周血单核细胞）中检测到在癌症患者中的肿瘤特异性T细胞疫苗试验诱导肽特异性T淋巴细胞。能实现自动化识别的肿瘤抗原表位的酶联免疫斑点试验法板预先准备的，移液洗板，读，酶联免疫斑点试验定量分析可能是肿瘤或病毒特异性T细胞应答给出。

（3）抗感染免疫中的应用

    CTL （细胞毒性T淋巴细胞）在抗病毒的免疫反应中起着重要的地位， CD4 +辅助性T细胞亚群的Th1 / Th2的平衡，抗感染中起着同样重要的作用。此外，使用ELISPOT测定法可以检测CK IFN2γ H IV -特异性CTL反应，免疫相关的信息的?elisa酶联免疫斑点试验法也可以用来评估的H IV21粘膜的CD4 + T细胞的免疫应答引起的感染的方法，进一步了解，作为以及? IVgp 120克二氧化碳表达霍乱毒素DNA疫苗的免疫原性。在许多抗菌免疫的研究，该方法还起着重要的作用。

（5）应用器官移植

    受体对供体特异性HLA抗体的存在不仅介导的超急性排斥反应，但也导致急性排斥反应，敏感的患者需要器官捐赠的限制同种抗原，从而提高移植的等待时间。一个单一的抗体分泌细胞elisa酶联免疫斑点试验是一个强大和有效的检测，具有灵敏度高。因此，刺激记忆B细胞的增殖，分化为浆细胞，建立了一种用于检测特定的HLA- ELISPOT法是抗体产生细胞的*手段。

（6）其他

    此外，elisa酶联免疫斑点试验检测方法移植研究，疫苗开发，TH0 /的Th1 / Th2细胞转化分析，自身免疫性研究，癌症研究，过敏机制探索IL24 （白细胞介素- 24 ）诱导的免疫球蛋白亚型转换，传染病研究，抗原表位的本地化地图免疫和体液免疫的研究和其他方面的重要应用。

    elisa酶联免疫斑点试验在体内的影响提供了一个测试基准调节免疫功能，从而在癌症研究，免疫学被广泛使用。因为，用ELISA法相比，酶联免疫斑点试验法更灵敏的，而用有限稀释法LDA ，酶联免疫斑点试验法更容易操作，CK和胞内染色法，酶联免疫斑点试验法更广泛。