通用型DNA损伤彗星检测试剂盒?主要用途

通用型DNA损伤彗星检测试剂是一种旨在采用组织细胞碱性凝胶电泳，在电场环境下，损伤变性的DNA片段迁移形成特定的形态，即DNA移动尾巴，来进行体外评价和半定量分析DNA损伤程度的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于新鲜动物细胞、组织、血液、骨髓等样品的DNA损伤研究，包括DNA链断裂、氧化性碱基损伤、DNA剪切损伤、DNA交联、DNA修复等，应用于环境和药物毒理学、放射学、氧化应急反应等研究。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，操作简便，重复一致。

技术背景

彗星检测技术（Comet assay），又称为单细胞凝胶电泳检测技术（single cell gel electrophoresis assay；SCGE）或微凝胶电泳检测技术（microgel electrophoresis assay），是基于变性切离的DNA片段，在电场的影响下，从细胞中移出的原理，而完整的超螺旋DNA仍然保持在细胞核内。通过凝胶电泳，呈现出分子迁移图形，形成彗星拖尾（comet tail）现象，即完整DNA的细胞染色体为“头"，而松散和断裂的DNA为“尾"，以此评价DNA损伤程度。这是分析单一细胞DNA链断裂的敏感方法之一。其技术方法的基本步骤是：*，细胞固定包埋在凝胶里；第二，细胞裂解处理；第三，DNA变性处理；第四，电泳迁移；第五，染色和图像分析。由此观察DNA迁移形态，进行体外检测，成为细胞DNA损伤研究的基本手段。其中电泳条件将决定检测的敏感程度。碱性电泳（alkaline electrophoresis）为常规电泳检测，可以检测单链DNA断裂、双链DNA断裂、大部分无嘌呤核酸位点（apurinic site）和无嘧啶核酸位点（apyrimidic site）、碱不稳定DNA结合物（alkali-labile DNA adduct）等DNA损伤。

产品内容

胶体液（Reagent A） 毫升

基质液（Reagent B） 毫升

清理液（Reagent C） 毫升

裂解液（Reagent D）     毫升

电泳液（Reagent E）     500毫升（用户自备）

中和液（Reagent F）     200毫升（用户自备）

染色液（Reagent G） 毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存染色液（Reagent G）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月 

用户自备

无离子水：用于稀释电泳缓冲液

磨砂载玻片和盖玻片：用于放置样品进行微凝胶电泳的器材

电泳槽：用于微凝胶电泳的装置

恒温培养箱或恒温水槽：用于孵育反应

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

90 mm培养皿：用于样品处理、染色等的容器

荧光显微镜：用于观察细胞彗星现象

实验步骤

一、 琼脂载玻片准备

1． 准备1张磨砂载玻片，磨砂面朝上

2． 将胶体液（Reagent A）置于微波炉里加热溶化（注意：避免溢出）

3． 放进40℃恒温水槽孵育10分钟

4． 移出xx微升胶体液（Reagent A）到载玻片中间

5． 盖上洁净的盖玻片

6． 轻压盖玻片5分钟

7． 放进4℃冰箱里备用

二、 样品准备

实验开始前，将基质液（Reagent B）置于微波炉里加热溶化，然后放进40℃恒温水槽备用。然后进行下列操作。

1． 准备好新鲜培养细胞、组织样本、血液样品等 （1 X 105细胞）

2． 移入到1.5毫升离心管 

3． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为300g

4． 加入xx毫升清理液（Reagent C），混匀

5． 移取20微升到新的1.5毫升离心管

6． 加入xx微升在40℃恒温水槽里的基质液（Reagent B）

7． 用枪头上下抽吸混匀

8． 用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片

9． 即刻移取75微升细胞基质混合液到载玻片上

10． 用新的盖玻片盖上

11． 轻压盖玻片5分钟

12． 放进4℃冰箱里冷却10分钟，直至胶体凝结，避免光照

13． 用大拇指推动移走盖玻片

14． 将载玻片放进9cm培养皿

15． 加入xx毫升预冷的裂解液（Reagent D）

16． 放进4℃冰箱里孵育60分钟

17． 倒去裂解液

三、 凝胶电泳

1． 移出xx毫升电泳液（Reagent E）到250毫升三角烧瓶里 

2． 加入225毫升无离子水，充分混匀后，标记为电泳工作液

3． 加入xx毫升电泳工作液到上述9cm培养皿

4． 室温下孵育30分钟

5． 倒去电泳工作液

6． 将载玻片置于（具有温度控制的）水平电泳槽里

7． 加入适量的电泳工作液到电泳槽里，恰好在载玻片之上

8． 插上电源，设定电压25伏或电流300毫安

9． 在4℃环境下，电泳30分钟

10． 断开电源，取出载玻片

11． 放进无离子水里浸润2次，每次1秒

12． 放进9cm培养皿

13． 加入xx毫升中和液（Reagent F）

14． 在4℃冰箱里孵育5分钟

15． 倒去中和液

16． 空气中晾干