10058.1 v.A
细胞培养细菌污染定性荧光检测试剂盒产品说明书
主要用途
细胞培养细菌污染定性荧光检测试剂盒是一种旨在通过特异性核酸荧光染料使活体细菌立刻染色，呈现点
状或杆状等绿色荧光的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人
体和动物细胞培养中革兰氏阳性和阴性细菌的定性检测。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，检测敏感，
荧光清晰。
技术背景
细胞培养中的主要微生物污染包括支原体（mycoplasma）、细菌、真菌、酵母和病毒等。在含有抗生素的培
养液中，低水平的细菌污染则难以观察和发现。SYTO-9染料为一种自由穿透质膜，并特异性结合核酸的荧
光染料，一旦结合，呈现强力的绿色荧光。细胞培养细菌污染定性荧光染色技术，通过SYTO-9对细菌核酸
的染色，替代细菌培养技术，具有快速检测细胞培养中细菌的存在，在荧光显微镜下（激发波长485nm，
散发波长500nm）下观察到绿色点状（dots）或杆状（rods）。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
染色液（Reagent B） 微升
稀释液（Reagent C） 毫升
产品说明书1 份
保存方式
保存在-20℃冰箱里，避免光照；有效保证6 月
用户自备
1.5 毫升离心管：用于工作液配制的容器
载玻片和盖玻片：用于样品染色的载体
台式离心机：用于悬浮细胞操作
细胞培养板或培养皿：用于培养细胞的容器
荧光显微镜：用于观察荧光染色
实验步骤
实验开始前，将-20 的试剂置于室温下冻融。然后移取xx 微升染色液（Reagent B）到1.5 毫升离心管，加
入xx 微升稀释液（Reagent C），混匀后，标记为染色工作液，放进暗室里备用。
一、贴壁细胞培养检测
1． 准备好待测细胞培养至50％铺满率
2． 小心移取5 毫升细胞培养容器里的培养液到15 毫升锥形离心管
3． 放进台式离心机离心15 分钟，速度为1000g
4． 小心抽掉上清液
5． 加入xx 毫升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
6． 放进台式离心机离心15 分钟，速度为1000g
7． 小心抽掉上清液
8． 加入xx 微升清理液（Reagent A），混匀
9． 移取20 微升混匀液到洁净的载玻片上
10．放进37 培养箱孵育10 分钟，使其晾干
11．快速在酒精灯火上加热固定（注意：切忌过热处理）
12．加上xx 微升清理液（Reagent A）在载玻片上，覆盖样品
13．室温下孵育5 分钟
14．小心抽去清理液
15．加上xx 微升染色工作液在载玻片上，盖上盖玻片
16．在室温下，暗室里孵育5 分钟
17．（选择步骤）移去盖玻片，小心抽去染色液
18．（选择步骤）小心加上xx 微升清理液（Reagent A）在载玻片上，覆盖样品
19．（选择步骤）小心抽去清理液
20．封片处理
21．置于荧光显微镜下观察染色（400 至1000 倍放大倍数）：激发波长485nm，散发波长500nm
胞浆内或细胞外呈现点状、杆状、散粒、纤丝状等绿色荧光
二、悬浮细胞培养检测
1． 将待测悬浮细胞（1 X 105 总量）移入到15 毫升锥形离心管
2． 放进台式离心机离心15 分钟，速度为1000g
3． 小心抽去上清液
4． 加入xx 毫升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
5． 放进台式离心机离心5 分钟，速度为500g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
6． 小心抽去上清液
7． 加入xx 微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
8． 移取20 微升混匀液到洁净的载玻片上
9． 放进37 培养箱孵育10 分钟，使其晾干
10．快速在酒精灯火上加热固定（注意：切忌过热处理）
11．加上50 微升清理液（Reagent A）在载玻片上，覆盖样品
12．室温下孵育5 分钟
13．小心抽去清理液
14．加上xx 微升染色工作液在载玻片上，盖上盖玻片
15．在室温下，暗室里孵育5 分钟
16．（选择步骤）移去盖玻片，小心抽去染色液
17．（选择步骤）小心加上xx 微升清理液（Reagent A）在载玻片上，覆盖样品
18．（选择步骤）小心抽去清理液
19．封片处理
20．置于荧光显微镜下观察染色（400 至1000 倍放大倍数）：激发波长485nm，散发波长500nm
胞浆内或细胞外呈现点状、杆状、散粒、纤丝状等绿色荧光
注意事项
1． 本产品为20 次操作
2． 操作时须戴手套
3． 操作时，严格无菌操作
4． 染色时，避免光照
5． 细胞染色前后的清洗过程中，小心操作
6． 阳性图像可见绿色发亮的细小点状、杆状等染色；标准细菌染色见下图：
7． 如果有真菌和酵母污染，可见较大的胞体染色
8． 如果为细胞碎片，可见不规则染色
9． 本公司提供系列细胞培养污染检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定荧光清晰