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上海哈灵生物科技有限公司
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公司信息
细菌总ATP酶活性酶连续反应光谱法定量检测试剂盒产品说明书
2017-11-27 阅读(1064)
主要用途
细菌总ATP酶活性酶连续反应光谱法定量检测试剂是一种旨在使用ATP酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，测定ATP水解产生的ADP过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反应， 即采用光谱法测定其氧化后峰值（NADH浓度）的变化，以此进行测算单位酶活性的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适合于各种细菌细胞ATP酶的总活性检测。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景
腺苷三磷酸酶，又称为ATP酶（adenosine triphosphatase；ATPase或ATP phosphohydrolase；EC3.6.1.3），属于磷酸水解酶，可以催化含磷的酸酐分解，即催化三磷酸腺苷分解为二磷酸腺苷和无机磷。ATP酶的去磷酸化反应释放出能量，成为细胞生命代谢的能源。ATP酶为跨膜蛋白（transmembrane），帮助传输各种代谢分子进出细胞。根据ATP酶的结构和功能，分为五类不同的ATP酶，即F、V、A、P和E型。F型，又称为F1F0型，主要在线粒体、叶绿体或细菌细胞膜上，进行氧化磷酸化或光合作用；P型，又称为E1E2 型，存在于细菌和真核细胞膜和细胞器上，其功能在于水解ATP获得能量，跨膜运输各种化学分子，包括Ca2+传输性、Na+-K+ /H+-K+传输性、H+传输性和所有细菌型等。V型，又称为V1V0型，主要存在于真核细胞的液泡（vacuole）中。A型，又称为A1A0型，存在于古生菌（archaea）中。E型，为细胞表面的酶。基于底物ATP， 受到各种组织细胞中的 ATP酶的水解，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，由还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），所产生的峰值变化（340nm），来定量分析ATP酶的总活性。
用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作
恒温摇床：用于细菌培养
培养箱：用于反应孵育
比色皿：用于光谱分析的容器
分光光度仪：用于光谱分析
注意事项
1．本产品为20次操作，包括背景对照
2．操作时，须戴手套
3．系统操作过程中，背景测定只需1次
4．建议样品忌用磷酸缓冲溶液
5．如果测定初期，背景对照吸光读数不稳定，表明体系均衡温度不理想，建议样品加入前孵育由3分钟延长至5分钟
6．加入样品启动反映后3秒内即刻光度测定
7．反应测定值由高到低变化；测定可以持续20分钟
8．测定值由高到低变化，即0分钟测定读数高于10分钟或20分钟测定读数，表明有酶活性
9．光谱测定后，比色皿须清洗*
10．建议待测样本蛋白浓度为100微克/50微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量；注意计算公式的调整（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒30030.1）
11．ATP酶活性单位浓度定义：在37℃温度下，pH 7.5条件下，每分钟内能够氧化1微摩尔还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）所需的酶量作为一个活性单位
12．本公司提供系列ATP酶类技术产品
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测准确
