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培养基细胞实验设备的清洗消毒方法

时间:2014-7-23阅读:1408
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  培养基细胞实验设备的清洗消毒方法
  
  在组织细胞培养基中,体外细胞对任何有害物质都非常敏感。微生物产品附带杂物,上次细胞残留物及非营养成分的化学物质,均能影响培养细胞的生长。因此对新使用和重新使用的培养器皿都要严格*的清洗,且要根据器皿的组成材料不同,选择不同的清洗方法。
  
  1、玻璃器皿的清洗
  
  组织细胞培养中,使用量zui大的是玻璃器皿,故工作zuizui大的是玻璃器皿的清洗。一般玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、侵酸和冲洗四个步骤。清洗后的玻璃器皿仅要求干净透明无油迹,而且不能残留任何物质。
  
  (1)浸泡:初次使用和培养使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡,以使附着物软化或被溶液掉。新的初次使用的玻璃器皿,在生产及运输过程中,玻璃表面带有大量的干固的灰尘,且玻璃表面常呈碱性及带有一些对细胞有害的物质等。新瓶使用前应先用自来水简单刷洗,然后用*液浸泡过夜,以中和其中的碱性物质。再次使用的玻璃器皿则常附有大量刚使用过的蛋白质,干固后不易洗掉,故用后要立即浸入水中,且要求*浸入,不能留有气泡或浮在液面上。
  
  (2)刷洗:浸泡后的玻璃器皿一般要用毛刷沾洗涤剂刷洗,以除去器皿表面附着较牢的杂质。刷洗要适度,过度会损害器皿表面光泽度。
  
  (3)浸酸:清洁液是由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水按一定比例配制而成,其处理过程称为浸酸。清洁液对玻璃器皿无腐蚀作用,而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质。清洁液去污能力很强。是清洗过程中关键的一环。浸泡时器皿要充满清洁液,勿留气泡或器皿露出清洁液面。浸泡时间一般为过夜,不应少于6小时。清洁液配制时应注意安全,须穿戴耐酸手套和围裙,并要保护好面部及身体裸露部分。配制过程中可使重铬酸钾溶于水中,然后慢慢加浓硫酸。并不停的用玻璃棒搅拌,使产生的热量挥发,配制过程中可使重铬酸钾溶于水中,然后慢慢加浓硫酸。并不停的用玻璃棒搅拌,使产生的热量挥发,配制溶液应选择塑料制品。配成后清洁液一般为棕红色。
  
  (4)冲洗:培养基玻璃器皿在使用后,刷洗及浸泡后都必须用水充分冲洗。使之尽量不留污染或洁液的残迹。冲洗用洗涤装置。即省力、效果又好。如用手工操作,则需流水冲洗十次以上,每天水须灌满及倒干净,用蒸馏水清洗3-5次,晾干备用。
  
  2、胶塞的清洗
  
  细胞培养中所用的橡胶制品主要是瓶塞。新购置的瓶塞带有大量*及杂质,应先用自来水冲洗,再做常规处理,常规清洗方法是:每次用后立即置入水中浸泡,然后用2%NaOH或洗衣粉煮沸10-20分钟,以除掉培养中的蛋白质。自来水冲洗后,再用1%*浸泡30分钟或蒸馏水冲洗后再煮沸10-20分钟,晾干备用。
  
  3、塑料制品的清洗
  
  塑料自制品现多是采用无毒并已经特殊处理的包装,打开包装即可用,多为一次性物品。必要时用2%NaOH浸泡过夜,用自来水充分冲洗,再用5%盐酸溶液浸泡30分钟,zui后用自来水和蒸馏水冲洗干净,晾干备用。
  
  细胞培养基的zui大危险是发生培养物的细菌,真菌和病毒等微生物的污染,污染主要是由于操作者的疏忽而引起,常见的原因有操作间或周围空间的不洁,培养器皿和培养液消毒不合格或不*,由于有关培养的每个环节的失误均能导致培养失败,故细胞培养基的每个环节都应严格遵守操作常规,防止发生污染。
  
  消毒方法分为三类:(A)物理灭菌法(紫外线、湿热、过渣等)。(B)化学灭菌法(各种化学消毒剂)。(C)抗生素。
  
  (1)紫外线消毒:用于空气,操作台表面和不能使用其它法进行消毒和培养器皿。紫外线直接照射方便、效果好,经一定的时间照射后,可以消灭空气中大部分细菌,培养室紫外线灯应距地面不超过2.5米,且消毒进物品不宜相互遮档,照射不到的地方起不到消毒作用。
  
  紫外线可产生臭氧,污染空气,试剂及培养液都有不良影响,对人皮肤也有伤害,不宜近照射也进行实验操作。
  
  (2)温热消毒:即高压蒸气消毒,是一种使用zui广泛、效果的消毒方法。温热消毒时,消毒物品不能装得过满,以防止消毒器内气体阻塞而千百万危险,保证其内气体的流通。在加热升压之前,先要打开排气阀门排放消毒器内的冷空气,冷气空气排出后,关闭排气阀门,同时检验安全阀活动自如,继后开始升压,当达到所需压力时,开始记算消毒时间。消毒过程中,操作者不能离开工作岗位,要定时检查压力及安全,防止消毒及表皮意外事件发生。
  
  常用物品消毒压力及时间:
  
  培养液、橡胶制品、10磅10分钟;
  
  布类、玻璃制品、金属器械、18磅20分钟。
  
  上两种是zui常见的物理消毒方法。
  
  (3)化学消毒法:zui常见的是70%酒精及1‰的新洁而灭,前者主要用于操作者的皮肤,操作台表面及无菌室内的壁面处理。后者则主要用器械的浸泡及皮肤和操作室壁面的擦试消毒。化学消毒法操作简单、方便有效。
  
  (4)抗生素消毒:确切应记成抗生素灭菌,主要用于培养用液灭菌或预防培养物污染。

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