培养基复苏细胞及冻存细胞的实验操作

    细胞培养基被冻存在10％二甲基亚砜（DMSO）中防止结晶的形成，结晶的形成会损害细胞。然而，二甲基亚砜对细胞有毒性，快速的进行细胞复苏是很重要的。

　　步骤：

　　1．从液氮中取出一管细胞；

　　2．将冻存管置于37℃水浴中2分钟（或放到管内溶液恰好*溶解）；

　　3．将细胞转移到一15ml Falcon管中；

　　4．加入5ml ES培养基（用培养基冲洗冻存管）；

　　5．离心3分钟；

　　6．弃上清，用2ml ES培养基重悬细胞，至少吹打10次；

　　7．接种在明胶包被的6孔或6cm组织培养皿；

　　8．孵育。

冻存细胞实验步骤

1．1×PBS洗细胞并留少许PBS在培养皿内；

　　2．用细胞瓜刀收集细胞；

　　3．将细胞转入15ml Falcon管内并离心3分钟；

　　4．弃去上清并将细胞培养基重悬于冷的冻存液中（10cm的培养皿用2ml，15cm的培养皿用6－7ml。）

　　5．分装于冻存管内，每管1ml；

　　6．置－80℃过夜，第二天移入液氮。