人胰腺癌 PANC-1细胞

上海沪震培训（细胞冻存和复苏的方法）仅共参考

细胞冻存前，仔细检查细胞冻存所需的仪器和试剂是否齐全：一般主要有：传代细胞单层、适宜生长液、灭活小牛血清、庆大霉素溶液、7.5％NaHC03溶液、0.25％胰蛋白酶溶液、标签用具：100ml方瓶（培养细胞用）、克氏瓶、红翻帽塞、吸管（10ml、lml）、细胞冻存管、二甲基亚砜、CO2孵箱、超挣台、倒置显微镜、2～8℃冰箱、-20℃冰箱、液氮罐

细胞冻存开：人胰腺癌 PANC-1细胞

1．细胞：选对数生长期细胞，收集细胞24小时前换液一次。

2．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5×106/ml，离心去上清，吸入离心管中。

3．冻存液：人胰腺癌 PANC-1细胞先用培养液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。

4．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加1.5毫升细胞悬液。

5．封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生爆炸伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。

复苏方法

1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。

2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。

3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮。

4．低速离心（500～1000转/分）5分钟，取上清后再重复用培养液漂洗、离心。

5．加入培养液适当稀释后，再移装入培养瓶中，置温箱培养，次日更换一次培养液后再继续培养。

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