数字PCR方案介绍

传统的荧光定量PCR，经过多年的发展，已是很成熟的实验方案了。其中，zui常用的是Taqman法和SYBR Green法。而在这二种方法当中，Taqman法又以其特异性高、定量，得到广大用户的认可。

但是Taqman法PCR，它还是一个相对定量的办法。它测的是一个Ct值，也就是PCR到第几个循环，荧光强度达到了一个设定值。

要想用Taqman方法得到：样本中到底有几个目标基因的拷贝，那么还是要再做一个标准品的（qPCR）曲线。才能知道样本的Ct值落在标准曲线的哪个位置上。再进一步推算出样本中的拷贝数量。

这样做，它首先要做一个标准曲线，那么，当然它就增加了工作量。另一方面，因为引入了标准品，而标准品也多少是有一定误差的。所以，实验中又多引入了一个实验的误差变量。

科学家为了克服传统定量PCR的上述两个弱点，那么又新发明了微滴数字PCR。

微滴数字PCR的原理，就是把原来一整管的PCR反应液，分散成几万个，甚至几百万个极微小的液滴。这些小微滴同时进行PCR反应，这样就可以计算出原来的反应液当中，有多少个目标基因的拷贝了。

了解了原理之后，我们来看看商业公司的实现方案。其中Bio-Rad公司和RainDance公司采用了油包水PCR的方法，用油把PCR反应液分隔成等体积的小液滴，再进行PCR反应。Life公司采用了芯片的方法，在芯片上预制了2万个小孔，把PCR反应液，物理地注入到芯片上的小孔中，密封后，进行PCR反应。

在本期的课程当中，我们将以Bio-Rad公司的仪器和方法为例，来介绍ddPCR。