总胆固醇（TC）含量测定试剂盒

总胆固醇（total cholesterol，TC）含量测定试剂盒说明书分光光度法   50管/48样 
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。 
测定意义： 
TC包括游离胆固醇和胆固醇酯。TC 是指组织中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。 
测定原理： 
利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯
转化为 FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化 FC 氧化，生成△4-胆甾烯酮和 H2O2；zui后利用
过氧化物酶催化H2O2氧化 4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物；在500nm有特征吸
收峰，其颜色深浅与TC含量成正比。 
自备仪器和用品： 
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、异丙醇和蒸馏水。 
试剂组成和配制： 
试剂一：异丙醇50mL（自备）。 
TC工作液：液体50mL×1瓶，4℃保存。 
TC标准品：液体1mL×1支，5μmol/mL，4℃保存。 
TC的提取： 
1、 组织中TC 的提取：按照组织质量（g） ：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取
约 0.1g组织，加入 1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清，即 TC
待测液。 
2、细胞、细菌中 TC 的提取：先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加 1mL
试剂一，超声波破碎 1min（强度20％，超声2s，停1s） ，8000g 4℃离心10min，取上清，
即 TC 待测液。 
3、血清（浆）等样品：直接测定。 
测定操作： 
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到500 nm，蒸馏水调零。 
2. TC工作液置于37℃水浴30min。 
3. 标准管：在1mL玻璃比色皿中依次加入 20 μL TC标准品和 980μLTC 工作液，迅速混匀，
5min后于500nm处比色，记为A标准管。 
4. 测定管：在1mL玻璃比色皿中依次加入 20 μL TC待测液和 980μLTC 工作液，迅速混匀，
5min后于500nm处比色，记为A测定管。 
注意：标准管只需测定一次。 
计算公式： 
1. 血清（浆）中TC 含量： 
TC（μ mol /dL）= C标准液×A测定管÷A标准管×100 mL 
= 500×A测定管÷A标准管 
C 标准液：5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。 
2. 组织中TC 含量： 
(1)按样本蛋白浓度计算 
TC（μ mol/mg prot）= C标准液×A测定管÷A标准管÷Cpr 
    = 5×A测定管÷A 标准管÷Cpr 
(2)按样本质量计算 
TC（μ mol / g）= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷W 
= 5×A 测定管÷A 标准管÷W 
C 标准液：5μmol/mL；样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g/mL 
3. 细胞、细菌中TC 含量： 
TC（μ mol /104
 cell）= C标准液×A测定管÷A标准管÷细菌或细胞（104
 cell /L） 
    = 5×A测定管÷A 标准管÷细菌或细胞（104
 cell /L） 
C 标准液：5μmol/mL。 
注意事项： 
zui低检出限为1mmol/L。