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筛选植物组织培养中杂种细胞的方法

时间:2014-12-22阅读:260
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融合细胞的筛选,并非所有的细胞都能融合。细胞融合本身又带有一定的随机性,除不同亲本细胞间的融合外,还伴有各亲本细胞的自身融合,需设法把含两亲本细胞染色体的杂种细胞分离或筛选出来。
   zui简便的办法无疑是应用选择培养基,使亲本细胞死亡,而仅让杂种细胞存活下来。为此,已先后利用亲本细胞的药物抗体、营养缺陷型和温度敏感性等遗传标记,建立了许多选择系统,并成功地利用于杂种细胞的筛选。 
   现在已分离得到的突变型主要有:药物抗性突变型,营养缺陷突变型、温度敏感突变型、紫外线敏感突变型等。
1.药物抗性突变型
   药物抗性突变型:细胞突变后对某一种药物的抗性显著增加而形成的一种突变型。某一种药物在达到一定浓度时,可以杀死野生型细胞。当把正常的野生型细胞培养在含有这一药物的培养基上,逐渐增加药物浓度,便可得到一条存活曲线。但是存在一些自发突变,这一细胞在药物的致死浓度中仍能生长。 
2.营养缺陷突变型
   营养缺陷突变型是培养细胞突变型中的另一种重要突变类型。这些突变型表现在合成低分子量代谢物(如氨基酸,嘌呤、嘧啶等)的能力发生了改变,以致这些细胞所产生的生物量不能满足正常生长的需要。 例如:氨基酸依赖型,嘌呤代谢缺陷型,嘧啶生物合成营养突变型,嗜糖性突变型等。目前已分离得到许多与氨基酸、嘌呤、嘧啶等生物合成代谢有关的酶缺陷营养突变型。这些突变型的发现,不仅可用于研究不同生化途径中的生物合成过程和代谢调节作用,而且还能用来作为体细胞遗传学分析中的遗传标记。
3.由营养缺陷变异型细胞组成的
   杂种的选择:营养缺陷型是指,在一些营养物(如氨基酸、碳水化合物、嘌呤、嘧啶或其他代谢产物)的合成能力上出现缺陷,而难以在缺乏这些营养物的培养基中存活的变异型细胞。可按反选择法分离所需细胞。由不同营养缺陷变异型细胞生成的杂种,像抗药性细胞的杂种一样,可用适当的选择培养基来进行筛选。
4.由温度敏感突变型细胞组成的杂种的筛选:
   培养的哺乳类细胞,均可在32℃到40℃之间的范围内生长,其zui适温度则为37℃
。但用筛选营养突变型细胞的类似方法,也可分离得到不能在38~39℃ (非许可温度)生长的温度敏感突变型细胞。要尽可能快地鉴定处带有所需表型的细胞克隆。zui长用的方法就是根据所需的特点来鉴定或选择细胞克隆。

 

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