当前位置:江苏科特商贸有限公司>>技术文章>>细胞转染技术---瞬时转染和稳定转染
细胞常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(*转染)。
瞬时转染(transient transfection)是将DNA导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中,重组DNA导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的DNA不必整合到宿主染色体,可在比稳定转染较短时间内收获转染的细胞,并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。
稳定转染(*转染)是用于建立克隆的细胞系,这种细胞系中转染的目的基因整合到染色体DNA中并指导适量目的蛋白的合成。一般来说(由细胞类型决定),形成稳定转染细胞的效率比瞬时转染(transient transfection)的效率低1到2个数量级。利用可选择的遗传标记物有利于从非转染细胞的中分离出的稳定转染物。
前者外源DNA/RNA 不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒DNA 转染效率较高,在转染后24-72 小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β 半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染,外源DNA 既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在。尽管线性DNA 比超螺旋DNA 转入量低但整合率高。 外源DNA 整合到染色体中概率很小,大约1/104 转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记,如氨丙基转移酶(APH;*抗性基因),潮霉素B 磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。转染技术的选择对转染结果影响也很大,许多转染方法需要优化DNA 与转染试剂比例,细胞数量,培养及检测 时间等。一些传统的转染技术,如DEAE 右旋糖苷法,磷酸钙法,电穿孔法,脂质体法各有利弊。
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