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GAPDH (甘油醛-3-磷酸脱氢酶) 是参与糖酵解的一种关键酶,由4个36 kDa 的亚基组成。除参与糖酵解外,有证据表明哺乳动物细胞中的GAPDH参与了多种胞内生化过程,包括膜融合 (membrane fusion)、微管成束 (microtubule bundling)、磷酸转移酶 (phosphotransferase)激活、核内RNA出核、DNA复制与DNA修复等。GAPDH蛋白几乎在所有组织中都高水平表达,常用于Western Blot检测中校正系统的内参。
Tubulin即微管蛋白,是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin分为α、β、γ、δ、ε等多种tubulin,其中Alpha Tubulin和Beta Tubulin可以形成异源二聚体,是形成微管的zui主要的两种Tubulin。Alpha tubulin和Beta tubulin分子量分别为55kDa和50kDa,其实际检测条带均在55kDa左右。作为内参,alpha tubulin的蛋白水平通常不会发生改变,因此被广泛用于Western Bloting时上样量是否一致的参照,也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。需要注意的是,在脂肪细胞内,alpha tubulin的表达量较少。
Actin是细胞骨架的主要成分,广泛表达于真核细胞。目前发现Actin至少存在6种异构体形式,主要分布在心肌、骨骼横纹肌和平滑肌组织中,调控细胞的收缩能力,也表达于非肌肉细胞,调节细胞结构和活力。β-Actin分子量为43 kDa,具有高度保守性,在细胞中的表达相对稳定,因此它常被用于校正系统的内参。
内参抗体包括beta-actin、beta-Tubulin、GAPDH等,性能稳定,质量可靠,可长期稳定储存,可在进行Western blot实验时检测目的产物、校正上样误差,也可作为空白对照,检测蛋白转膜是否*、整个显色或者发光体系是否正常。
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