ELISA实验的原理似乎很简单，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，间中夹杂着洗涤和封闭。然而，即使是平淡无奇的洗涤和封闭，如果做得不太好，也有可能毁了整个实验。

【ELISA试剂盒需要遵循的3个要点】
1.抗原或抗体能吸附于固相载体表面，并保持其免疫学活性;
2.抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;
3.酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的颜色反应的深浅绘制标准曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。

ELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗体，这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与*次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒 的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。

【怎样更好的发挥ELISA试剂盒的效果】
●在使用过程校正加样器；10ul以下加样器采用进口产品（芬兰、法国等）； 
● 仔细校正温度到37℃，水浴箱为佳；
●必须使用去离子水或蒸馏水，不得用自来水、矿泉水等。
●认真阅读使用说明书。  样品加样  
● 加样不准确；  
●没有混匀。  
●加样时一定要仔细。加样后，再检查，以防漏加、错加。  
●加样后，反复抽吸
●次混匀，防止血清聚集孔底，导致非特异性吸附。  洗涤  洗涤不*  
●每次注水洗涤，应静止30秒钟；  
●选用吸水纸作为衬垫，每次洗涤后扣干孔内水分； 
●可选用塑料洗涤瓶。  加酶反应 漏加 滴加后，认真检查各孔  结果判断  
●包括阴性对照孔在内，各孔显色普遍偏深； 
●包括阳性对照在内，各孔均无显色；  
●阳性对照不显色，而其它样本显色正常； 
●有些标本显色不深，判断阳性困难。  
● 可能是洗涤不充分；加样过量；温育时间过长温度过高；按说明书重新操作。如无改善， 可与生产厂家； 
●可能是漏加样本或酶液；温育时间过短温度过低；试剂保存不当活性下降；按说明书重新 操作。如无改善，可与生产厂家；  
●阳性对照漏加、错加或失效。重新操作。如无改善，可与厂家，索要对照品； 
● 重新操作。使用酶标仪，测定光吸收度，按P/N值标准判断。  ELISA试剂盒保存 保存不规范 一定要在2-8℃存放。不得过高，也不得冻存（冻存后，酶液将失效）。  对照品 对照品为冻干品 按对照管标示，加入相应体积的去离子水或蒸馏水复溶，充分溶解混匀。可按说明书使用。Elisa试剂盒瓶中齐全，质量有保障。