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近二十几年来,免疫学分析方法发展很快,特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后,使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。继50年代的免疫荧光(IFA)和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后,在70年代初期又建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。
【ELISA试剂盒原料及制造粗糙的试剂盒表现在】
准确度不高,重复性不好。原因可能为抗体配对效果不是*,抗体识别抗原的表位容易被破坏,包被抗体或检测抗体杂蛋白较多,没有纯化或纯化效果不好,影响检测的灵敏度和准确度。
客户辩别检测方法:
1.可采用已知浓度的重组细胞因子,稀释到检测范围内作为样本加入,看检测的准确性。
2.对用待测指标的重组细胞因子做试剂盒说明书上标定的zui小浓度稀释,可测出灵敏度,建议5个复孔以上才有意义。一般厂家以20个复孔做出的结果作为检测限。用此实验可验证出所购试剂盒的灵敏度是否如说明书所述,也可判断出所购试剂盒是否有夸大之说。
3.选定一个检测范围内的浓度做多孔重复,可看出平行性好不好。即板内CV值的大小,此操作时需要小心加样的准确性。对一些制作较粗糙的试剂盒来说,板间CV值是较大的。
4.如果有相同指标的进口试剂盒,可用对方的标准品作为样本,分别加入各自的试剂盒做检测,以检测试剂盒的真实性,准确性。如其中一种是的进口试剂盒,比较可靠的话,可作为标准来验证另一试剂盒的准确程度。
【ELISA试剂盒检测样本类型的判断】
目前ELISA试剂盒检测的样本中,除了细胞上清外,还有比较大的一部分是血清和血浆样本,有些试剂盒对血清和血浆样本的检测效果不好,表现在光值偏低,如RF因子存在的话,光值偏高。
购买产品的实验者如何分辨呢?对说明书上有说能做血清血浆的试剂盒,如有缓冲液。建议如下:用已知浓度的待测指标蛋白加入所测种属的血清直接加样和用分析缓冲液按说明书分别加样,得出结果如差异过大,即可得知分析缓冲液的效果如何,是否确实有作用。
对RF因子的检测,要相对麻烦一些。需要有RF因子,添加进去进行比较。但对常见的样本,除非有类风湿或其它一些特殊疾病,有RF升高的情况,一般RF因子在实验室中的实验动物的血清和血浆检测中可不考虑,但对人源的血清和血浆则做一做比对。
【ELISA试剂盒的选购方法】
1.可以对常规品种的指标,因为需要量较大,所以国内公司会用心做研发,一般做的不错,可以用国产的;对于不常用的指标,因为用量少,国内公司一般不做研,所以会用国外的。国产和进口盒子一起用,节省经费而且高性价比。
2.可以咨询该公司的技术人员,看看是否专业。
3.对其公司要做一个了解,对新的公司还要谨慎考虑。
ELISA试剂盒的一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应,产生了放大作用,使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来,这种技术被称为酶联免疫吸附试验法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)。
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