其它系列_肉桂醇脱氢酶(CAD)测试盒
测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
CAD是木质素生物合成途径中的关键酶之一,是木质素单体合成反应中的后一步,催化多种不同的肉桂醛(香豆醛、芥子醛以及松柏醛等)生成与之相应的肉桂醇。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类中,研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理,为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。
其它系列_肉桂醇脱氢酶(CAD)测试盒
测定原理:
CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH,在340nm下测定NADPH生成速率,即可反映CAD活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体25 mL×1瓶, 4℃保存;
试剂二:粉剂×2瓶,-20℃保存;
粗酶液提取:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
(1)在试剂二中加入10mL试剂一充分溶解混匀,室温使用涡旋振荡仪振荡溶解15min,如未溶解可适当延长振荡时间;置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;现配现用(配好后24h内用完);
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL试剂二,混匀,立即记录340nm处初始吸光值A1和 5min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。