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ELISA试剂盒在处理血清时应注意血清的三大特点:
1. 瓶装(500ml) 血清解冻步骤(逐步解冻法): -20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室温下全溶后再分装,一般以50 ml 无菌离心管可分装40~45 ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沈淀的发生。ELISA试剂盒勿直接由–20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。
2.heat-inactivation 是指56℃, 30 分钟加热已*解冻之血清。加热过程中须规则摇晃均匀。此热处理之目的是使血清中之补体成份(complement) 去活化。除非必须,一般不建议作此热处理,因为会造成沈淀物之显著增多,且会影响血清之品质。补体参与之反应有:cytolytic activities, contraction of smooth muscle, release of histamine from mast cells and plaets, enhanced phagocytosis, chemotaxis and activation of lymphocytic and macrophage cell type。
3. 血清必须贮存于–20 ~ -70℃,若存放于4℃,请勿超过一个月。如果一次无法用完一 瓶,可将40~45 ml分装于无菌50 ml 离心管中,由于血清结冻时体积会增加约10 %,ELISA试剂盒 必须预留此膨胀体积之空间,否则易发生污染或容器冻裂之情形。
ELISA试剂盒实验注意事项:
一. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
二. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
三. 底物请避光保存。
四. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
五. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
六. ELISA试剂盒不同批号组分不得混用。
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