上海研域仪器设备有限公司

如何做好ELISA试剂盒标准曲线

时间:2015-9-11阅读:239
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许多ELISA试剂盒检测都涉及到标准曲线的问题,标准曲线做的好与坏会直接影响到实验的结果,甚至是关系到实验的成败,那么究竟如何绘制或制作标准曲线呢?
做标准曲线样品检测时有几个问题需要注意

1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的,所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事,否则后面的实验结果无从谈起。
2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度,并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度,即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内,包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线,尽量要使实验样品的浓度在中间坡度zui陡段,即曲线几乎成直线的范围内。
3、采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度,这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。
4、检测标准样品时,应按浓度递增顺序进行,以减少高浓度对低浓度的影响,提高准确性。
5、标准曲线的样品数一般为7个点,但至少要保证有5个点。
6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系数R至少要大于0.98,对于有些实验,至少要0.99甚至是0.999.

·ELISA试剂盒评价的方法
1.发质控物进行调查,这是目前国内外常见的形式,采用定期发放质控物至各实验室,各实验室在规定的日期进行检验,并将结果报至组织者(部、省临检中心)。组织者通过统计分析,再将评价结果寄回实验室,使其了解工作质量,发现问题,提高质量。其缺点为由于各实验室吃小灶或互相打修改结果而达不到真正评价作用。
2.现场调查,事先不通知,临时派出人员到各实验室,规定采用常规方法,检测一组标本,进行评价。这种方法可以解决实际问题,进行现场指导,组织者常因人力、物力的原因而不能经常性进行。

·ELISA试剂盒实验记录
1.所有实验的原始资料均应存档;
2.所有的记录均应规范登记在册;
3.原始登记表应记录试剂来源、批号;
4.质控血清的来源及测定值并注明是否在控;
5.签上实验者姓名及审核者姓名。

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