活细胞的染色

Hoechst荧光染料

    大家耳熟能详的Hoechst系列染料是一种双苯甲亚胺（bisbenzimide）染料，主要有Hoechst 33258和Hoechst 33342等。它们是细胞膜通透性的小沟结合DNA染料，结合后发出明亮的荧光。Hoechst 33342的膜通透性比Hoechst 33258略好，相当易溶于水，细胞毒性小。它们可被大多数常用的荧光光源所激发，表现出相对较大的斯托克斯位移（激发/发射波长约为350/460 nm），因此适合于多色标记实验。在未结合DNA时，它们有着复杂的pH依赖光谱，在pH5时的荧光产量比pH8时要高得多。SDS等表面活性剂还能使荧光增强。

    Hoechst染料普遍用于多个细胞分析，包括细胞周期和凋亡研究，而且它们还是常用的核酸复染剂。此外，Hoechst 33258还有一个特殊的应用。由于它对疟原虫有毒性，因此可用于血液样本的流式筛选，并评估患者的药物敏感性。

SYTO核酸染料

    SYTO是活体核酸透性染料。这种染料对核酸的亲和力较低，可通过被动运输扩散透过大多数细胞的细胞膜。对活细胞和死细胞的DNA和RNA都可以进行染色。同时，也可用于革兰氏阳性和阴性细菌的染色。染料通过紫外光或可见光激发而发出荧光。目前有蓝、绿、橙和红等几种颜色。各种SYTO染料间的特性都不相同，包括细胞通透性、与核酸结合后荧光的增强度、激发和发射光谱、对DNA/RNA的亲和力等。与专门用于DNA染色的DAPI和Hoechst染料不同，SYTO还可以对RNA进行染色，因此，经过SYTO染色的细胞在细胞核和细胞质中都可以观察到染色。

    由于有些SYTO染料在中性pH条件下带正电荷，因此也可以对线粒体染色。死亡的酵母细胞经过染色后出现明亮的荧光，活的酵母细胞在线粒体和细胞核都可以观察到荧光。一些SYTO的染色还可以用于观察细胞凋亡。红色的SYTO染料可以用来作为绿色荧光蛋白、凝集素或者非通透性绿色SYTOX染料的复染剂。一些绿色的SYTO染料则是很好的细胞核复染剂。