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实验步骤
1. *的提取
取已发芽的水稻或小麦种子(幼芽长3~4cm)20粒,放在研钵 中研磨,匀浆用100ml水分多次冲洗,集中于150ml三角瓶并充分搅拌、静置1小时后,过滤入另一三角瓶,滤液中即含有*,若要短期保存时,可加甲苯数滴防腐,并放入冰箱中。ELISA试剂盒
2. 温度对活性的影响*
取试管5支,分别作15、30、45、60、75℃温度标记,并注明“酶液管",各加入酶提取液5ml;另取5支试管,也分别作15、30、45、60、75℃温度标记,并注明“淀粉液管",各加入0.5﹪淀粉液5ml;然后各管分别置于相对应温度的水浴 中,约5min后,待管内外温度一致,将酶液倒入相同温度的淀粉液管中,摇匀并记下时间,10min后取出(不同处理之间,时间要一致),放入冰水中冷却1min后,往每管加入I-KI溶液5滴,摇匀。观察颜色有何不同,比较不同温度对*活性的影响,判断zui适宜的酶促作用温度。
3. pH 对*活性的影响:
取4支中型试管,分别加入下列系列pH的磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液3ml,并作标记:pH 3.6、4.8、6.0、7.2。每管加入淀粉液3ml和*提取液2ml,充分摇匀,记下时间,放置30℃左右温度下20min后,向每管加入I-KI溶液5滴,摇匀,根据生成的颜色,比较*的活性。
4. 化学物质对*活性的影响ELISA试剂盒
取6支试管,编上1~6号,每管加入*提取液1ml及pH5.0醋酸盐缓冲液1ml,然后往1号管加蒸馏水1ml(对照)。2号管加1%NaCl 1ml,3号管加1%*1ml,4号管中加1%CuSO4 1ml,5号管加0.1%AgNO3 1ml,6号管加入0.1%HgCl2 (注意,有毒!)1ml,各管再加0.5%淀粉液2ml,摇匀后置于40℃恒温水浴中,并记录开始时间,保温8~10min,取出试管,冷却后向各管加入I-KI溶液5滴,摇匀,观察各管颜色的差异。
实验结果记录及分析ELISA试剂盒
1. 用文字说明经不同温度,pH及各种化学物质处理后各试管所显示的颜色。
2. 用文字简要分析环境条件对*活性的影响。
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