操作步骤

⑴、石蜡切片脱蜡至水。

⑵、 3%H 2 O2 室温孵育 5-10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。

⑶、蒸馏水冲洗， PBS 浸泡 5 分钟 x2 （如需抗原修复，可在此步后进行）。

⑷、 5-10% 正常山羊血清（PBS 稀释）封闭，室温孵育 10 分钟，倾去血清，勿洗。滴加 一抗 工作液， 37 ℃ 孵育 1-2 小时或 4 ℃ 过夜。

⑸、 PBS 冲洗， 5 分钟 x3 次。

⑹、滴加适量 *标记二抗 工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。

⑺、 PBS 冲洗， 5 分钟 x3 次。

⑻、滴加适量的 辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素 工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。

⑼、 PBS 冲洗， 5 分钟 x3 次。抗原

⑽、显色剂显色 3-15 分钟（DAB 或 NBT/BCIP）

⑾、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。

化染色步骤

冰冻切片 4-8μm ，室温放置 30 分钟后，入 4 ℃丙酮固定 10分钟，PBS洗，5分钟x3，用过氧化氢孵育5-10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。抗原