热引导的抗原决定簇修复（Heat Induced Epitope Retrieval，HIER）对大多数的抗体有益，尤其是对核抗原的修复作用更加明显，zui常用的抗原修复液是pH6.0的枸橼酸缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液，它们的作用原理是通过钠离子的螯合而实现的。抗原修复液的PH值非常重要，有效的抗原修复pH值要比修复液的化学成分更重要，同样的修复液随着PH值的升高染色的强度逐渐增强，但*PH值范围为6.0~10.0，对于大多数抗原这个范围的pH值都能进行有效的修复，有些抗体（如Ki-67、ER）则在PH值l.0~3.0和6.0~8.0更为有效。作为通用修复液碱性pH值的修复液要比酸性的有效，而对固定很长时间旧的存档组织，酸性pH值的修复液则优于碱性的修复液，所以两种抗原修复液可作为相互替补的进行抗原修复。在进行HIER过程中应防止切片的干燥，加热时必须达到规定的温度，保温时间要足够，对于一些不要抗原修复的抗体不要采用HIER处理，否则对染色无益，但有些抗体则需要利用多种修复联合应用。HIER方法有：

（1）水浴加热法  将脱蜡人水后的切片放人盛有修复的容器中，放人加热煮沸水中，当修复液温度达到95℃左右时计时l5min，自然冷却，PBS洗3min×3次。

（2）微波加热法  将切片放入修复液中微波加热使温度在96℃左右，计时l0min，在微波炉中停留2min，室温自然冷却，PBS洗3min×3次。

（3）高压加热法  将修复液在高压锅中煮沸，切片插在染色架上，放入锅中（要使修复液淹没切片）开始喷气时盖上压力阀。计时2min，冷水冲至室温取出切片，PBS洗3min×3次。抗体