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HA干扰的消除措施
由于标本中HA的来源是未知的,不能够准确的针对HA的结合位点进行操作,目前尚未有一个*消除HA干扰的方法。以下就现有的消除HA的方法进行分述。
稀释法
如果样本HA浓度含量不是很高,且它所造成的干扰不是很大时,稀释法是可以减少它的干扰,但不能*消除。据报道,稀释法对使用AxSYM 测定HCG中受到HA的干扰具有很好的消除作用,因为在它的稀释液中已经含有一定量低浓度的动物蛋白来吸附HA。在对其样本稀释后,降低了HA的浓度,在低浓度动物蛋白来吸附HA后,原有的干扰强度可明显减小。
使用异嗜性抗体阻滞剂、阻断试剂盒或阻断试管
目前市场上已经有商品化的阻断剂如:IIR、NS-ABT、HBR、Heteroblock、MAB33 及polyMAB33。将它们加入待测的样品中,利用非特异性和特异性阻断剂与HA结合从而达到减少干扰的目的。消除干扰的效果通常由干扰物的浓度、类别或亚类,以及阻断剂的类别和分型所决定。如,奥林巴斯公司在对铁蛋白检测时,用F(ab’)2 相关试剂提前处理待测样本可在一定程度上消除HA的干扰。异嗜性阻断试剂盒现在已广泛使用。其内部特制的免疫球蛋白,可用于中和免疫测定法中产生干扰的HA。HA阻断试剂对预防假阳性的HCG结果有很好的效果,但添加鼠免疫球蛋白对预防假阳性的HCG结果无影响。又如使用HA阻断试管。使用贝克曼化学发光免疫法测定检测如游离PSA特异性抗原等项目时,样本在检测前用HBT处理,大大减少了假阳性的发生率。抗体
提取法
可以采用吸附在氟乙烯表面的鼠McAb,固相结合在琼脂糖凝胶柱上的蛋白G或者蛋白A去提取HA的方法、三氟乙酸沉淀法、巯基试剂法、阳离子交换剂和亲和层析等方法,均对消除HA有一定效果。但不宜使用热或酸处理来灭活血清中的HA,因为大多数的分析物都不稳定。
利用活体*单链抗体作为捕获试剂
使用活体*单链抗体作为捕获抗体用于固相抗原的测定技术可以在一定程度上有效地避开HA的干扰。将活体*单链抗体作为捕获抗体结合到固相的抗原上,再加入已经用标记的亲和素结合到*上,形成固相抗原-活体*单链抗体-标记亲和素复合物,由于*与亲和素的结合为高度特异的结合,故可较有效地避开HA的干扰。此外,在活体*单链抗体与固相抗原发生特异性的反应结合过程中,即使样本里存在有HA,它以Fab-Fab的结合模式结合到过剩的*单链抗体试剂上,zui终也只能被冲洗清除,从而使测定在一定程度上避开HA的干扰。
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