(1)无毒和无菌

    无毒和无菌是体外培养细胞的首要环境条件。细胞在活体内，偶尔有细菌或有害物质入侵，因体内有强大的解毒系统和免疫系统，可将其解毒或清除，而不易受损害。但在离体的环境中，失去了防御系统，一旦有害物质入侵或细菌污染，可导致细胞死亡，前功尽弃。如培养瓶皿、支持物、培养基、瓶盖、瓶塞上若有细胞毒性，在培养过程中可导致细胞死亡。因此，在选用这些器皿、材料时要注意，若这些物品消毒不*，带菌或操作过程不小心使细胞污染，也会导致细胞死亡。若出现交叉污染，可使实验室原来的细胞系失去原有特性，应引起足够的重视。

(2)辐射线和超声波

1．可见光可见光的波长是390～780nm。可见光的各种有色光能引起细胞蜕变，延长核分裂的问期，还可显著降低细胞的附壁能力。因此，体外培养细胞应避免日光直接照射，在黑暗中进行培养或短期存放。

2．紫外线弱紫外线下耐受能力强的细胞变化不大，但对敏感的细胞有损害。紫外线强时，新分离的细胞显示：不能进行*的有丝分裂；在有丝分裂时增加了脱水收缩；在有丝分裂时细胞质的起泡减少。Elrlich腹水癌细胞经紫外线照射后，用飞点紫外线显微镜观察发现被照射表面形成水泡，随后细胞膨胀，损害也渐变严重。

3．放射线X射线对细胞有明显损伤。β射线可影响细胞核的分裂。γ射线使核分裂数减少并出现不正常的核分裂，可使细胞死亡。

4．超声波和振动在超声波振动下，细胞很快会破裂，开始是胞质发生紊乱的流动，原生质胶体结核也有明显变化，若停止超声波振动可回复。细胞致死的原因是由于产生空化作用所致。当超声波在2．5w／cm2时，细胞受损，染色体发生畸变，首先发生畸变的是核染色体。

(3)细胞接种浓度(密度)

    在体外培养细胞中，细胞接种数对细胞的生长有影响，适宜的接种密度，可以促使细胞增殖，接种密度太低或太高都不利于细胞的生长增殖。如果培养液与细胞的容积比例大于2000：1，生长物质弥散到细胞外的比例将是细胞内达到低于zui小限度的浓度，此时细胞不能再增殖，培养液中的pH变碱，抑制细胞生长，细胞变圆不能贴壁，甚至引起细胞死亡等。如果接种密度太高，每个细胞周围培养液的容积降至O．007mm3以下，由于弥散率的降低，细胞内生物质的浓度增加，容易使排除物或其他代谢产物达到饱和，能量来源也很快耗尽．因此也会妨碍细胞的增殖。

    如何选择适宜的接种浓度要根据细胞的代谢和生长繁殖速度以及工作的需要而确定。一般来说，细胞代谢旺盛、生长速度快的细胞如肿瘤细胞，接种浓度宦偏低；而正常组织细胞生长较慢，代谢不够旺盛，接种浓度可偏高；如果是为了保种或不需急用，接种浓度可偏低些；有时为了便于观察细胞形态结构，接种浓度也可适当降低。

(4)容器转动速度和悬浮搅动速度

    有时为了研究的需要而将培养细胞在容器中进行旋转或搅动，如贴壁细胞在旋转管中培养，使转鼓的转速提高，细胞增殖率随之提高。其原因可能是转动使足够的营养流动和较充分的氧化作用之故。

    当悬浮搅拌培养细胞时，搅拌速度既不能太快，也不能太慢。如太慢，细胞易结团、下沉和贴壁，不利于细胞在悬浮状态下增殖。如果太快．容易起泡沫，细胞易窒息致死，同时，强烈地搅动易使细胞因机械损伤而破裂。所以选择适宜的搅拌速度很重要。如BHK2l的搅拌速度适宜为460～330r／min；淋巴细胞(Raji)株，在200r／min和400r／min时细胞致不增不减，或稍有下降，而搅拌速度增加到600r／min时出现生长；类淋巴细胞(Namal—va)生长速度快，在80～100r／min时既不结团，又不需加抗泡沫剂，且细胞生长仍然很快。各种细胞的适宜搅拌速度不一致，通常与细胞的特性和质量有关，予以注意。