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体外培养的细胞

时间:2015-12-23阅读:408
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    体外培养的细胞按照生长方式分为两种:贴壁细胞和悬浮细胞。

(1)贴壁细胞

    细胞沿着培养容器的支撑面生长,细胞首先铺满容器,如果继续生长,部分细胞以*层细胞为支撑继续生长,体外培养的大部分细胞属于贴壁细胞。根据细胞的生长形态大致分为下面4种类型:

①成纤维细胞:是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞(mesenchymalcell)分化而来,数目zui多,细胞大,多为突起的纺锤形或星形的扁平细胞,细胞核呈规则的卵圆形,胞质突起,生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外,凡由中胚层间充质起源的组织,如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。另外,凡培养中细胞的形态与成纤维类似时也可称之为成纤维细胞。

②上皮细胞:位于皮肤或腔道表层的细胞,细胞呈扁平不规则多角形,*有圆形核,细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动,处于膜边缘的细胞总与膜相连,很少单独行动。起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态;

③游走细胞:能够在组织内自由移动的细胞,呈散在生长,一般不连成片,胞质常突起,呈活跃游走或变形运动,方向不规则。如哺乳动物的小淋巴细胞、嗜中性白血细胞等。

④多形细胞型:难以确定其规律和稳定的形态的细胞,如神经细胞、多形T细胞等。

(2)悬浮细胞

    细胞分散在培养液中,呈悬浮生长,一般成圆形,这类细胞容易大量繁殖,如某些类型的癌细胞及白血病细胞。

1)其他细胞分离技术

(1)荧光分离技术

    荧光分离技术也称为荧光激活分选法,它首先对细胞进行荧光染色,标记上特定的荧光,然后将细胞悬液稀释到一定浓度,保证细胞可以单个通过检测器,当有光信号打到细胞表面时,检测散射光,按照设定的标准将细胞分流到不同的收集管。这种分离方法需要借助荧光激活的*(如流式细胞仪)来完成。

(2)电泳分离技术

    在一定PH值下细胞表面带有净的正或负电荷,能在外加电场的作用下发生泳动,这种现象称为细胞电泳(cell electrophoresis)。各种细胞或处于不同生理状态的同种细胞电荷量有所不同,因而在一定的电场中的泳动速度不同,从而实现细胞分离的目的。

3)常用于组织消化的酶种类

(1)*

    从牛、羊或猪的胰脏中提取的一种蛋白水解酶,它能从多肽链中的赖氨酸和*残基中的羧基侧。*通过水解黏结相邻细胞的糖蛋白,从而使细胞之间分离。根据提取纯度的不同,蛋白酶分为精制和粗制*,粗制*因含有其他蛋白酶,所以比精制*分离细胞的活性好,但杂蛋白酶可能导致粗制*的毒性要比精制的高。

(2)胶原酶

    能特异性地降解胞外胶原蛋白,使胶原蛋白和纤维粘连蛋白的网状结构解离,而不损坏细胞表面结构的完整性。商业化的胶原酶产品一般是梭状芽孢杆菌裂解液的粗提物,是胶原酶、*等蛋白水解酶混合物,能降解胶原蛋白和其他蛋白,及多糖等胞外大分子物质,适用于多种组织的消化应用。

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