体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，以1：2或1：3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养。细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，细胞倍增3～6次。细胞传代后，一般经过j个阶段：游离期、指数增生期和停止期。

一、材料

1．标本80％或接近汇合成片的细胞。

2．试剂硝化液、PBS、培养液。

3．器具吸管、离心管、培养瓶、*。

二、操作步骤

1．在超净工作台中吸出培养瓶内的培养液。

2．加入少许消化液，以液面覆满平底为宜，轻轻摇动培养瓶，消化液铺满所有细胞表面。

3．如果在倒置镜下观察被消化的细胞，细胞质回缩，细胞变圆，细胞间隙增大，立即终止消化。

4．吸出消化液，加入3～5ml新鲜培养液，用吸管反复吹打瓶壁上的细胞，吹打时要按顺序进行，以确保所有瓶壁均吹打到，吹打时动作要轻柔，不要用力过大，尽可能不要出现泡沫，以避免细胞的机械损伤，制成细胞悬液。

5．用计数板计数，计算细胞的浓度，用培养液调整适当的细胞浓度后再分瓶培养。一般情况，传代后的细胞在2h左右就能附着在培养瓶壁上，2～4d就可在瓶内形成单层，需要再次进行传代。