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提高染色体显示的措施

时间:2015-11-18阅读:308
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(一)原理

    显示染色体主要是显示分裂中期细胞。因细胞分裂处于中期时,染色体的长短和大小恰到好处,是研究染色体的阶段。所以,*需要获得多量的中期分裂象;第二·人类染色体有46条,密集在细胞中,相互交错缠绕,必须把它们分散开,才便于观察。

(二)提高染色体显示的措施

1.提高细胞分裂象数

(1)刺激细胞增殖:大多数培养细胞群在指数增生期时,细胞分裂指数在1%~5%;其中二倍体细胞和初代培养细胞较低,平均1%~2%,传代细胞系,尤以永生性转化细胞系和肿瘤细胞系等较高,可达3%~5%。另一些如初代淋巴细胞培养则很少出现分裂,为此常采用刺激细胞增殖措施。刺激淋巴细胞增殖主要用PHA,白菜豆(phaseolus vulgaris)中提取,有商品出售,PHA分P和M两型,M型作用较强。PHA特别适用于外周血淋巴细胞培养,有强烈的刺激T淋巴细胞增殖的作用,用量每10 ml培养液加PHAO.2ml.

(2)阻抑中期分裂

1)秋水仙素法:处于指数增生期的培养细胞分裂虽然活跃、分裂象数量较多,但做分析用尚显不足。主要原因是,分裂象虽多,但并不同步,都处于分裂各不同期,其中处于分裂中期的细胞数并不很多。应用秋水仙素作用能显著提高中期分裂象数(或用其衍生物秋水仙胺,秋水仙胺作用比前者强10倍)。秋水仙素有特异抑制纺锤丝蛋白合成作用,能阻抑分裂中期活动,而对DNA作用较小,借此可截获很多中期分裂象,产生类似提高分裂指数的效应。该药有强烈的毒性,用量过大或作用时间过长,可使染色体缩短和发生异常分裂现象。一般用量:秋水仙素O.02~0.8μg/ml营养液;秋水仙胺0.(902~O.08μg/ml营养液,作用时间2~6h。

2)低温处理:把指数生长期细胞放置到室温或冰箱中4℃4~12h,因温度降低时DNA合成受抑制,细胞不进入分裂期,当恢复用37℃温箱培养并用秋水仙素后,会出现代偿性分裂高潮,也产生提高分裂象数效应。

2.促染色体分散措施

(1)低渗处理:应用低渗盐溶液处理,可使细胞体积胀大、染色体松散,便于制备染色体标本。低渗可用蒸馏水、1%*、加水稀释培养液(1:3)、O.075M KCl等方法。目前zui多用的是0.075M KCl,在37℃水浴中作用20~40min,效果。

(2)醋酸固定:大多数固定剂都使组织细胞收缩,而醋酸却有膨胀固定作用,和醇类混合固定有利于染色体松散效应。现多应用醋酸/甲醇(1:3)混合液固定,用时宜现用现配。

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