(一)原理

    显示染色体主要是显示分裂中期细胞。因细胞分裂处于中期时，染色体的长短和大小恰到好处，是研究染色体的阶段。所以，*需要获得多量的中期分裂象；第二·人类染色体有46条，密集在细胞中，相互交错缠绕，必须把它们分散开，才便于观察。

(二)提高染色体显示的措施

1．提高细胞分裂象数

(1)刺激细胞增殖：大多数培养细胞群在指数增生期时，细胞分裂指数在1％～5％；其中二倍体细胞和初代培养细胞较低，平均1％～2％，传代细胞系，尤以永生性转化细胞系和肿瘤细胞系等较高，可达3％～5％。另一些如初代淋巴细胞培养则很少出现分裂，为此常采用刺激细胞增殖措施。刺激淋巴细胞增殖主要用PHA，白菜豆(phaseolus vulgaris)中提取，有商品出售，PHA分P和M两型，M型作用较强。PHA特别适用于外周血淋巴细胞培养，有强烈的刺激T淋巴细胞增殖的作用，用量每10 ml培养液加PHAO．2ml．

(2)阻抑中期分裂

1)秋水仙素法：处于指数增生期的培养细胞分裂虽然活跃、分裂象数量较多，但做分析用尚显不足。主要原因是，分裂象虽多，但并不同步，都处于分裂各不同期，其中处于分裂中期的细胞数并不很多。应用秋水仙素作用能显著提高中期分裂象数(或用其衍生物秋水仙胺，秋水仙胺作用比前者强10倍)。秋水仙素有特异抑制纺锤丝蛋白合成作用，能阻抑分裂中期活动，而对DNA作用较小，借此可截获很多中期分裂象，产生类似提高分裂指数的效应。该药有强烈的毒性，用量过大或作用时间过长，可使染色体缩短和发生异常分裂现象。一般用量：秋水仙素O．02～0．8μg／ml营养液；秋水仙胺0．(902～O．08μg／ml营养液，作用时间2～6h。

2)低温处理：把指数生长期细胞放置到室温或冰箱中4℃4～12h，因温度降低时DNA合成受抑制，细胞不进入分裂期，当恢复用37℃温箱培养并用秋水仙素后，会出现代偿性分裂高潮，也产生提高分裂象数效应。

2．促染色体分散措施

(1)低渗处理：应用低渗盐溶液处理，可使细胞体积胀大、染色体松散，便于制备染色体标本。低渗可用蒸馏水、1％*、加水稀释培养液(1：3)、O．075M KCl等方法。目前zui多用的是0．075M KCl，在37℃水浴中作用20～40min，效果。

(2)醋酸固定：大多数固定剂都使组织细胞收缩，而醋酸却有膨胀固定作用，和醇类混合固定有利于染色体松散效应。现多应用醋酸／甲醇(1：3)混合液固定，用时宜现用现配。

(三)材料方法

1．材料

(1)细胞

(2)试剂

Hanks液

2％NaHCO3

1640合成培养基，含小牛血清lO％～15％

秋水仙素溶液

(3)器具：酒精灯、培养瓶、吸管、刻度离心管。

2．方法

(1)培养细胞：取处于指数生长期，用较大平皿培养的，80％～90％汇合单层培养细胞。

(2)加秋水仙素：使用zui终浓度为O．02～O．8gg／ml营养液；温箱继续培养6～10h；麦用低温封闭法：把培养细胞置于4℃条件下6～12h后，再于37℃温箱中继续培养6～10h处理(加秋水仙素)。

(3)采集分裂细胞：可利用分裂中期细胞体变圆与底物附着不牢特点，此时手持培养瓶，左右反复横向水平摇动，令培养液在培养细胞表面反复冲洗，应用此法可使90％的中期分裂细胞从瓶壁脱落；注意勿用力过猛，以防多量非分裂细胞脱落影响观察。

(4)离心：收集培养液，1000r／min离心5～lOmin。

(5)低渗处理：吸除上清液、加入预温至37℃的0．075 mol／L KCl溶液，在温箱中静置
20～30min．

(6)预固定：向悬液中加新鲜1：3醋酸、甲醇固定液lml，用吸管吹打均匀；此措施能起到先使细胞表面轻微固定，可防止固定后细胞粘连成块。

(7)固定；离心，同(4)，吸除上清液，加新鲜固定剂5~10ml；加固定剂时要用一手微斜持离心管，另手用吸管吸取固定剂，把固定剂逐滴滴在离心管壁上·使之慢慢流人离心管中，然后轻轻吹打均匀，置15~20min。

(8)重复(7)，末次离心后，小心吸除大部上清液，据悬液中细胞密度大小，余下固定液0．5～1ml。

(9)制片：用滴片法制片，按如下步骤：*洗净载物片，勿留任何油脂，置冰箱中储存备用。滴片前先从冰箱中取出冷载物片1张，在载物片表面出现细微水气时，立即向片的一侧滴2～3滴细胞悬液(如固定液不散，可能因载物片未洗净或不冷所致)·滴片时的距离能保持半米高度才好。滴片后置室温中令其自然干燥，或用吹风机热风吹干亦可。如此制备好的标本可置盒中备用(做显带或荧光观察等)或立即进行染色观察。

(10)染色和封片：一般常用Giemsa染色；取干液Giemsa 1份加pH6．8磷酸缓冲液9份混合，染色10min后，水洗、晾干、可直接观察(使用油浸镜)；如标本需要保存或做长时间观察，可过二甲苯两次后，用中性树胶封片(或先迅速过丙酮两次，每次30s)后，再过二甲苯，然后封片亦可。