(一)贴壁细胞(包括半贴壁细胞的换液)

    初代培养成功，由于营养缺乏，代谢产物增多，细胞未达到饱和密度，仍需继续培养，因此，需采取换液方式来更新营养成分以满足细胞继续生长繁殖的需要。其换液方法比较简单．即弃去旧液，加人与原培养液相同的等量*培养基。

(二)悬浮细胞

1.淋巴细胞的短期培养无需换液，但加人生长因子或有丝分裂原(PHA、PMA、co一nA、PWM、LPS等)后，细胞不仅会发生转化而且会发生分裂繁殖，此时培养基中的营养或分并不能维持细胞的营养需求，代谢产物增多，细胞不适宜生长，需进行换液。

2．白血病细胞或淋巴瘤细胞体外长期培养时，采用半量换液的方式，待达到饱和密度时才能传代。半量换液的方法如下：

(1)将原培养瓶竖起，在30min内，若细胞沉于瓶底，可用吸管轻轻吸去一半上清液弃去，再加入等量的新鲜*培养基。

(2)细胞不能沉于瓶底，可吸出细胞悬液，采用低速离心(1000r／min 10min)弃去一半上清液加入等量的新鲜*培养基，混匀后再转入原瓶继续培养。

三、初代细胞培养的传代

    初代培养后由于贴壁细胞的相互汇合，使整个瓶底逐渐被细胞覆盖；悬浮细胞增殖，数量增加甚至达饱和密度，细胞难以继续生长繁殖，需要进行分瓶培养，这种使原代细胞经分散接种的过程称之为传代。每进行一次分离再培养称之为传一代，传至5～10代以内的细胞通常称为次代培养细胞，传至10～20代以上的细胞，通常确定为传代细胞(或称传代细胞系)，初代培养的传代是关键。应注意如下几点：

1．初代培养的贴壁细胞生长密度不高时，或未能达到覆盖整个瓶底时不能急于传代。

2．初代培养的贴壁细胞多为混合细胞，形态各异，往往是上皮样细胞和成纤维样细胞并存，采用*消化时要掌握好消化时间。

3．吹打已消化的细胞要轻巧，以尽可能减少对细胞的机械损伤。

4．传代时细胞接种数量要多一些，以利于细胞的生存和繁殖。如果消化分离的细胞悬液有组织块，也一并传人到培养瓶，尽量减少细胞损失。