一种无缝基因拼接技术

随着PCR技术的出现，人们逐渐的打开通往研究生命本质的大门，这也使PCR技术成为了上个世纪zui为伟大的技术之一。通过PCR技术能在体外迅速、大量、灵敏地扩增出目的基因片段，但是需要灵活的改造基因，只有目的基因片段是远远不够的，还需要一种的基因加工手段——基因拼接技术。在实验操作过程中，无论出于基因改造、载体改造以及将来会出现的物种改造等多种涉及DNA操作的实验，都不可避免会使用到基因拼接技术。

     1989年Horton等人提出了SOE法（Gene splicing by over lap extension）即通过复制时DNA链的交错延伸来实现基因拼接；1991年Lebedenko等人提出SDL方法（Gene splicing by directed ligation）即直接拼接法。目前常用的基因拼接技术大多数是基于这两种方式发展而来，这些方法虽然能够完成基因的拼接，但是表现出来的问题也非常多，主要表现在以下几个方面：1、外源片段的引入；2、基因出现移码突变；3、操作繁琐，拼接成功率低；4、一个反应通常只能完成2个片段的拼接。

针对这一系的问题，在核酸酶及其反应体系上经过逾7年的研发，推出了一种多基因拼接技术以及配套的技术体系，打破了传统拼接技术的种种限制，主要表现在以下几个方面：1、在同一个反应体系中能同时完成3-5个基因片段拼接；2、对于拼接片段适用性广，200-8000bp的片段都能用于拼接；3、拼接成功率高，普通两两拼接≥85%；4、不会带入任何的外源序列。该技术主要特征在于（如图所示），在反应体系中一种核酸酶能非特异的识别DNA 5’-3’端的14-20bp的碱基，并沿5’-3’进行消化，使DNA形成粘性末端，在退火的情况下粘性末端通过碱基互补配对链接形成一个整体。