快捷植物基因组 DNA 提取试剂盒

Plant Genomic DNA Kit

For Research Use only

仅供研究用

货号：QYS-ZP310

离心柱型 100T/50T

产品简介：

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和*的缓冲液系统，用于提取植物细胞中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司*新型材料，、专一吸附DNA，可大限度去除植物细胞中杂质蛋白及其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。

提取得率：

注：不同来源的植物组织材料中提取的 DNA 的量会有差异

试剂盒组成：

储存条件：

试剂置于室温（15–25℃）干燥条件下可保存 12 个月；更长时间的保存可置于 2-8℃。

产品特点：

简单快速：一小时内即可获得超纯的基因组 DNA。

超 纯：获得的 DNA 可直接用于 PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1． 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。

2． 若植物缓冲液 A 和 B 中有沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解，并摇匀后使用。

3． 所有的离心步骤都为使用台式离心机在室温下进行。

操作步骤：

使用前请先在漂洗液 W2 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

• 处理材料：

取植物新鲜组织 100 mg 或干重组织 20 mg，加入液氮充分碾磨。加入 400μl 缓冲液 S 和 6 μl RNase A(10 mg/ml)，旋涡振荡 1 分钟，室温放置 10 分钟。

• 加入 200 μl 缓冲液 G，充分混匀，旋涡振荡 1 分钟。
• 12,000 rpm(~13,400×g )离心 5 分钟，将上清移至新的离心管中。
• 加入 200μl 异丙醇，颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
• 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm(~13,400×g )离心 30 秒，倒掉废液，吸附柱放入收集管中。
• 向吸附柱中加入 700 μl 漂洗液 W2（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm(~13,400×g )离心 30 秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。注意：如果吸附柱膜呈现绿色，向吸附柱中加入 500μl 无水乙醇，12,000rpm(~13,400×g )离心 30 秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。
• 向吸附柱中加入 500 μl 漂洗液 W2，12,000 rpm(~13,400×g )离心 30 秒，倒掉废液。
• 将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟，以*晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。
• 将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200 μl洗脱缓冲液 TE，室温放置 2-5 分钟，12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟，将溶液收集到离心管中。

注意：为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱 中，室温放置 2 分钟，12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 分钟。洗脱缓冲液体积不应少于 50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内(可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围)，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；且 DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。

DNA 浓度及纯度检测

• 得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
• DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰，OD260 值为 1 相当于大约 50 μg/ml 双链DNA、40 μg/ml 单链 DNA。
• OD260/OD280 比值应为 1.7–1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。