*是从欧洲的百合科植物秋水仙(Colchicum autumnale L．)的球茎中分离出的一种生物碱，许 多百合科秋水仙属植物中都含有* ]．它是治疗痛风性关节炎急性发作的药 ]．由于其特殊 的结构和强抗癌活性，临床也用于某些癌症的治疗，一直受到人们的关注 ]．但是其治疗量和中毒量比较 接近，毒副作用很大，应用受到了严格的限制．随着药剂学的发展，许多*新制剂(例如：缓控释 片l7 、贴剂[}l 、凝胶剂_9]、滴丸 。。)已研制开发出来．这种新制剂的药物用量小，生物利用度高，从而降低了 *的毒副作用．可见，发展准确可靠地测量原料和制剂中*的含量及其生物等效性的方法就 显得尤为重要．作者综述了国内外*含量的测定方法，着重介绍了近年来*测定方法的新发 展．

1 伏安法测量*含量

近几年来，伏安法测定*的含量成为电化学分析的研究方向之一．该方法简便快速，主要应用于 *原料药和制剂以及体液中*含量的分析l1卜 ]．表1列举了该方法的主要性能指标．

汪乃兴等 u研制了*PVC电极，考察了该电极的各种特性．结果表明，Nernst响应范围为3．2 ×l0 ～3．2×10 tool·I ，响应迅速，性能稳定，干扰少，选择性较好．冶保献等 研究了*在玻 碳电极上的电化学行为，并用于模拟血清样品中*的含量测定；结果表明，在HAc NaAc缓冲溶液 中，*在玻碳电极上产生一不可逆的氧化峰，峰电位为1．22 V ( s．SCE)．峰电流与*浓度在8．O0×10一 ～1．O0×10 tool·I -1范围内有良好的线性关系，检出限为1．OO×10 tool·I ．瞿万云等n 3l 用多壁碳纳米管修饰电极研究了*在该修饰电极上的伏安行为，发现多壁碳纳米管能显著提高秋水 仙碱的氧化峰电流；该方法的线性范围为2．0×10 ～1．0×10 mol·I 一，开路富集2 min后检出限为8．5 ×10一 mol·I ．于素华等l1 在0．05 tool·L H SO 介质中，用碳糊电极(石墨粉：液体石蜡油一1．5 ：1)阳极扫描伏安法测定*，检出限为1×10 mol·I ，线性范围为4．0×10 ～1．0×10 mol ·I ，氧化时出现两个氧化峰，峰电位分别为1．O7 V和1．33 V (VS．SCE)，峰电位随pH 值的升高而正移． Zhang等 通过电聚合法在玻碳电极上形成邻苯二胺／单壁碳纳米管聚合膜．该电极的线性范围为1．0× 1o ～1．0×10 tool·L ，检出限为1×10 tool·I ．Zhang等n 利用微型化石墨电极定量分析了秋水 仙碱的含量，在0．01 tool·L H。PO ／HC10 (pH 2．05)溶液中，*的氧化峰峰电位为0．97 V (VS． SCE)，线性范围为2．0×10 ～1．0 x 10 tool·I ，检出限为1×10一tool·I ’ ，与HPI C法和胶束电动 色谱法有相同的灵敏度．Holork等 。 通过循环伏安法、线性扫描伏安法和差分脉冲伏安法考察了乙炔黑／ 双十六烷基膦酸复合膜修饰玻碳电极的电化学性质．与未修饰玻碳电极相比，乙炔黑／双十六烷基膦酸复合 膜修饰玻碳电极能显著提高*的电化学响应，*的氧化峰电流明显增强，该修饰电极线性范围 为1．0×10～～ 4．0×10_j mol·I 一 ，检出限为4．0×10 tool·L ．

2 联用技术测量*含量

2．1 液相色谱一质谱联用(HPI C—MS)法

HPI C—MS法既有液相色谱的高分离能力，同时又具备了质谱的高分辨能力，已在药物分析及毒物分析 中得到广泛的应用．HPI C—MS法主要用于血液与尿液中*的测定¨j 叫和*片的相对生物 利用度和生物等效性的研究 ．

陈晓红等 建立了血液和尿液中*的HPLC—MS的测定方法．血液和尿液样品经三一乙 腈(1：99)溶液提取后，用Waters Oasis(MCX)固相萃取小柱进行净化，在XDB—C 柱上以甲醇一0．04 三溶液(33：67)为流动相，以*离子(m／z)400EMq-HI 为定量分析依据；结果表明，秋水仙 碱在6．0～1 000．0 g·I 范围内均呈线性关系，检出限为6．0 g·I ，回收率在81．0 ～109．0 0 o范围 内，其日内精密度<6．4 ，日问精密度<9．9 ．Tracqui等 纠建立了血液和尿液中*的HPLC—MS 的测定方法．血液和尿液样品在pH 8．0经二氯甲烷提取后，采用Microbore(Alltech)一C 柱(1．0 mm× 250 mm，5 m)，流动相为乙腈一2 mmol·I 乙酸铵(75：25)，pH ===3，流速为0．05 mI ·min ，以秋水仙 碱离子(m／z)4()()[M+H] 为定量分析依据；结果表明，*在5～200 g·I 范围内均呈线性关系， 检出限为0．6 g·L ．Qiu等 。。利用HPI C—ESI—MRM 法快速检测痕量的*，结果表明，* 在0．01～10．0 g·I 范围内均呈线性关系，检出限为0．01 g·I ．尿液中*的回收率在96．0 ～ 114．0 范围内，全血中回收率在94．0 ～113．0 范围内，其日内精密度<8．3 ，日问精密度<10．6 ． Jiang等 刈建立了快速检测血清中*的HPI C—MS方法．血清样品经正己烷二氯甲烷一异丙醇(300 ：150：15)溶液提取后，用HPI C分离，在Zorbax Extend C1 8(5 m，150 mm × 4．6 ram)柱上，以甲酸一10 mmol·I 乙酸铵溶液甲醇(1：49：75)为流动相，以*离子(m／z)4OOEM+HI 为定量分析依据， 结果表明，*在0．050～ 1O g·I 范围内均呈线性关系，检出限为35 ng·I ，平均回收率在 95．6 ～105．3 范围内，其日内精密度<2 ，日问精密度<7％．

2．2 化学发光*动注射联用法

荆海燕等 发现甲醛存在时，*可在酸性介质中氧化*并产生较强的化学发光．根据这 一实验现象并结合流动注射技术，建立了一种*一甲醛*化学发光测定*的分析方法． 在*化条件下，化学发光强度与*浓度在1．0×10 ～6．0×10 tool·L 范围内呈线性关系，检 出限为3．0×10 tool·L ．

3 毛细管电泳法

毛细管电泳是近年来发展迅猛的新型分析分离技术，是能够同时进行快速分离与分析的一种 新技术 ．

古今 利用毛细管电泳法测定*片、毛慈姑、冰球子中*含量，并对冰球子、毛慈姑 进行鉴别．采用石英毛细管柱(70 m × 60 cm)，30 mmol·L 硼酸盐溶液(pH 8．5)为电解缓冲液，操作 电压为20 kV，检测波长为200 nm．结果表明，*片中*的含量为99 ，毛慈姑中*的 含量为0．09 ，冰球子中*的含量为0．02 ．冰球子和毛慈姑具有不同的电泳图谱可用于鉴别． 4 液相色谱法测量*含量 液相色谱法(HPL．C法)具有测量速度快、分离效能高、固定相和流动相种类多、选择范围宽、检出限 低、灵敏度高以及可供选择的检测器多等特点，已广泛应用于药物分析中，成为药物含量测定的主要方法之 一 ． HPLC法用于*测定的报道有很多 。 ，目前美国药典和欧洲药典均采用HPLC法测定秋水仙 碱的含量 。

曹茂堂等 采用HPI C法测定了复方*凝胶中*的含量，Kromasil C s为色谱柱，乙腈一 水(30：70)为流动相，流速为1．0 mI ·min ，检测波长为254 nm；结果表明，线性范围为0．1840．90 fig· L ．Richard等 用反相HPLC法测定了血浆、血清、尿液中*及其衍生物的含量，采用Microsorb C 为色谱柱，1戊烯磺酸一甲醇乙酸乙酯(60：26．6：13．4)为流动相，流速为1．5 mL·min一 ，检测波长为 254 nm；结果表明，*在1．0～200 g·I 之间线性关系良好，检出限为4 g·I ．卞晓岚等 建立 了复方*胶囊中*的含量测定的HPI C方法，色谱柱为Kromasil C ，流动相为0．05 tool· L_。一甲醇(50：50)，流速1．0 mI ·min ，紫外检测波长350 nm；结果表明，*在3．05～ 9．15 mg·L 之间线性关系良好，平均回收率为100．19 ，RSD 一0．86 (”一9)．台海川等 叫利用 HPI C法测定*的含量，色谱柱为Shim—pack C。 ，流动相为甲醇一水(44：56)，流速为1 mL·rain～ ， 检测波长为353 nm；结果表明*在0．054～2．7 mg·I 范围有良好线性关系，回收率为101．2 ， RSD=1．0 (”一5)．袁理春等 采用HPLC法测定丽江山慈姑鳞茎不同部位及云南省西北部和四川省 越西县22个野生丽江山慈姑居群中的*含量，色谱条件为Angilant extengd Bonus RP—C s色谱柱， 甲醇一异丙醇一冰乙酸二乙胺一水(20：5：0．25：0．5：75)为流动相，检测波长为254 nm，流速为1．0 mI · min ．Chen等 利用HPI C法研究了*在大鼠体内的肝胆排泄和肝肠循环，所采用色谱条件为 Agilent Zorbaxextend C 。色谱柱，乙腈一0．001mol·L 辛烷酸(28：72)为流动相，pH 3．0，流速为1．0 mI ·min ，检测波长为245 nm．俞永梅等 采用HPLC法测定*片中*的含量，采用C s色 谱柱(4．6 mm × 150 mm，5 m)，流动相为0．05 tool·I ／甲醇(50：50)，流速为1．0 mI · min ，检测波长350 nm．结果表明*在6．444～15．036 mg·L 范围内，线性关系良好，平均回收 率：100．3 (”一6)．Sarg等l3 利用HPLC法测定了秋水仙种子和片剂中*的含量，采用Zorbax— ODS C 。柱为色谱柱，甲醇一水(60：40)为流动相，流速为0．5 mI ·min ，检测波长为243 nm．除欧洲药典 方法外，HPI C法测定*所采用的都是反相C 柱进行分离，一般用紫外检测器检测，不同之处主要 在流动相和检测波长的选择上，具体条件见表2．

5 其他方法

5．1 薄层色谱法

薄层色谱是快速分离和定性分析微量物质的一种很重要的实验技术，属于固 液吸附色谱，是一种微量、快速而简单的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点．薄层色谱分离和测量*的报道较 少 ．

Sarg等 。 利用薄层色谱法测定M．persica球茎的提取液中*的含量，采用硅胶G层析板，用氯 仿一甲醇(95：5)为展开剂，风干后在243 nm 波长处进行薄层扫描，结果表明该方法重现性好，准确性高，从 1～6 g的含量均可简便地测定，可用于原料药的检测，也可用于药物制备的质量控制．Lukic等 门用苯一乙 酸乙酯一甲醇一二甲胺一水作展开剂，在硅胶G板上展开，用薄层色谱仪于260 nm 波长处检测荧光强度，该方 法可用于测定*和相关生物碱，缺点是展开剂较复杂．梁雁冰等 用双波长薄层色谱法检测了嘉兰 中*的含量，硅胶G层析板，以氯仿丙酮二乙胺(7：3：1)为展开剂，25 三氯化锑的氯仿溶液为显 色剂，样品吸收波长为2O nm，参比波长625 nm．蔡毓琼等 。 应用薄层色谱法对植物样品及制剂中秋水仙 碱的含量进行测定，用二乙胺乙醇(1：1)溶液喷洒，30 min后显色，在荧光灯下尺 一0．5处呈亮蓝色，荧 光在2 h内稳定，结果表明，该测定方法的线性范围为2O～100 mg，测定的变异系数为6％．含量测定与紫 外分光光度法比较稍低．Bodoki等 用60F254硅胶层析板，以氯仿一丙酮一二乙胺(5：4：1)为展开剂，用 薄层色谱仪于350 D．m波长处检测荧光强度．

5．2 分光光度法

分光光度法利用*分子结构中的共扼体系在紫外光区的吸收特性，在特定的波长处测定吸光度， 通过吸收度与溶液浓度的关系来计算含量 ．分光光度法由于方法简便，准确度高，作为中国药典法被用 于*原料药和片剂的含量检测 。]和*片含量均匀度的测量 ．该方法简单、易行，但难于满 足痕量和复杂样品分析的要求，而且在紫外区进行测定，选择性不理想．

5．3 荧光法

用荧光法测定*的方法不多，主要是利用*水解产物与金属离子形成荧光配合物的荧光 分析法 ．虽然方法简单，灵敏度较高，但影响因素较多，使用范围较窄，其选择性和分析应用都还有待 进一步研究 ．

5．4 极谱法

极谱法测定*的含量是一种比较老的测量方法，具有操作简单、快速、灵敏度高、专属性强等优 点㈧ ．

5．5 圆二色性测定法

根据*分子的立体构型的圆二色性，建立了测定*的圆二色性方法，并测定了*片 剂中*的含量，结果表明，片剂中赋形剂对测定结果基本无影响，该方法可以有效地测量*片 的含量 ．

6 结束语

以上综述的*测定方法中，使用比较广泛的方法有分光光度法、HPLC法和HPI C MS法．笔者 认为在日常生产过程中，对于*的原料药含量测定的方法可用分光光度法和HPI C法，两种方法检测要求低，方法通用性强，故成为药典的收录方法；对于*制剂含量的检测使用HPLC法比较合适； 由于HPLC—MS法的检出限较低，对于体液中*含量的测量以及*药代动力学和生物等效性 的研究，使用HPI C—MS法比较合适．

*修饰电有原位或在线测量生物体体液中*含量的潜质，必将成为测定*含 量的研究热点之一．