当前位置：上海雅吉生物科技有限公司>>技术文章>>细胞凋亡检测实验步骤
1. 凋亡细胞的制备
小鼠腹腔注射*25 mg/kg体重，10 h后解剖取胸腺，分离胸腺细胞。用PBS洗两遍，调整待测细胞的浓度为2×106 /ml，备用。
2. 200 μl细胞悬液加入1 ml冷PBS，轻轻震荡使细胞悬浮，1000 rpm 4 ℃离心10 分钟，弃上清。
3. 重复步骤2两次。
4. 将细胞重悬于200 μl 标记缓冲液。
5. 加入10 μl Annexin V-FITC，轻轻混匀，避光室温反应15 分钟或4 ℃反应30 分钟。
6. 加入300 μl标记缓冲液，立即上机（流式细胞仪）检测。
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔，切勿用力吹打细胞，尽量在4 ℃下操作。
2. 反应完毕后要尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应一小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC是光敏物质，在操作时要注意避光。
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