一、收集细胞
 
收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500~ 1 000 r/min离心5 min，弃去培养液。
 
二、细胞洗涤
 
3 ml PBS洗涤1次。
 
三、乙醇固定
 
离心去PBS，加入冰预冷的70%的乙醇固定，4℃，1-2小时。
 
四、细胞重悬
 
离心弃去固定液，3 mlPBS重悬5 min。
 
五、细胞过滤
 
400目的筛网过滤1次，500-1000 r/min离心5 min，弃去PBS。
 
六、染色
 
用1 ml PI染液染色，4℃避光30 min。
 
七、流式细胞仪检测
 
PI用氩离子激发荧光，激光光波波长为488 nm，发射光波波长大于630 nm，产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。
 
八、结果判断
 
在前散射光对侧散射光的散点图或地形图上，凋亡细胞与正常细胞相比，前散射光降低，而侧散射光可高可低，与细胞的类型有关；在分析PI荧光的直方图时，先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片，在PI荧光的直方图上，凋亡细胞在G1/G0期前出现一亚二倍体峰。如以G1/G0期所在位置的荧光强度为1.0，则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为0.45，可用鸡和鲑鱼的红细胞的PI荧光强度做参照标准，两者分别为0.35和0.7，可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。