混合淋巴细胞培养实验步骤1.  刺激细胞的准备
 
常用的刺激细胞有EB病毒转化的B淋巴细胞（如N23细胞）或PBMC。
 
（1）取处于对数生长期的N23细胞，离心后重悬于新鲜*培养基中。
 
（2）调整细胞数为1×106 /ml~2×106 /ml，移置于塑料培养瓶或者50 ml 离心管中。
 
（3）用60 ℃照射3000 rad。
 
混合淋巴细胞培养实验步骤2.  反应细胞的准备
 
分离纯化待检个体的PBMC。
 
3.  LC
 
（1）按2×106PBMC与1×105经3000 rad照射的N23细胞的比例，重悬于4 ml 10%FCSRPMI1640。
 
（2）放置于小培养瓶中进行MLC，培养瓶保持直立，培养4 d 内不要晃动。
 
（3）第5 d 加入1 ml 新鲜培养基。
 
4.  如要测定3H-TdR掺入率，一般可在MLC的第5 d 进行。
 
5.  如要检测MLC中NK、LAK或特异性杀伤性T淋巴细胞（CTL），一般在7~10 d 左右收获效应细胞。
混合淋巴细胞培养实验步骤