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劲马讲述酶标板的度及线性标准
2014-4-4 阅读(1589)
劲马讲述酶标板的度及线性标准
上海劲马在免疫学检测中，酶标板的检测性和保证酶标板性的浓度范围，是决定使用哪种酶标板品牌的非常重要因素。本实验采用商业化的ELISA实验方法来分析比较11种不同品牌的酶标板的性和线性范围。实验证明在所有测试的酶标板中，NuncMaxiSorp酶标板具有zui广的线性范围（4-2000pg待测蛋白/mL）。MaxiSorp酶标板也显示出了良好的重复性，另外100%的MaxiSorp酶标板的R2超过0.99，因此它在所有测试的不同品牌的酶标板中具有zui的结果。
缩写BSA：牛血清白蛋白ELISA：酶联免疫吸附测定HRP：辣根过氧化物酶O.D.：吸光值PBS：磷酸盐缓冲液TNF-alpha：人肿瘤坏死因子a
在定量实验中例如酶联免疫吸附测定（ELISA），不仅了解待测试剂的zui小浓度是非常重要的，而且酶标板的性及保持测试性的浓度范围也同样重要。酶联免疫吸附测定（ELISA）中常使用一次性多孔板，而聚苯乙烯板的特性可能改变试剂与固象部分的结合方式。这也反过来影响酶标板在不同反应物浓度时的性。保证酶标板准确度的浓度范围（线性范围）和线性曲线的重复性，是客户选择酶标板品牌着重考虑的因素。下面的酶联免疫吸附测定（ELISA）实验中，我们考察了NuncMaxisorp和其它竞争品牌酶标板的准确性和线性范围。
实验方法用商业化ELISA试剂盒中的稀释液来准备包被试剂：将0.1ml的捕获抗体溶液（稀释至4μg/mL）加入酶标板的每孔中，密封酶标板，室温下放置过夜。重复洗酶标板3次，每个孔中加入0.3mL封闭液（10g/L溶于PBS的牛血清白蛋白溶液），抚育一小时，重复上述冲洗步骤。用稀释液将人肿瘤坏死因子a以1：2梯度稀释，浓度从2000pg/mL到2pg/mL。灵敏度测试用来考察每个品牌的zui小可检测浓度。人肿瘤坏死因子a浓度。加0.1mL的人肿瘤坏死因子a至每个孔中，室温下抚育2小时。重复上述冲洗步骤，加0.1mL抗体（稀释到250ng/mL）至每个孔中，室温下抚育2小时。重复上述冲洗步骤，加入0.1mL的辣根过氧化酶-链霉亲和素溶液（1:200稀释）至每孔中，室温下抚育20分钟。经过zui后一次冲洗后，每孔加入0.1mL的显色剂，反应20分钟后立即加入0.05mL的终止液。要控制显色反应时间，以保持每个酶标板的一致性。用分光光度计读取每块酶标板在波长492nm下的吸光值，间隔5nm，100ms延时，300ms测试时间。检测阈值的计算方式为整板的空白孔（不加人肿瘤坏死因子a）的平均OD值加上两倍的标准偏差。以检测到超过阈值吸光度所对应的zui小抗原浓度来评价酶标板的灵敏度。通过线性范围测定来确定每块微孔板保持测量性的浓度范围。按以上步骤进行实验，所用的酶标板检测结果如表3所示，每一纵栏的吸光值（吸光值=测得的吸光值-空白孔吸光值），取重复孔平均值作为每板的数值。用Excel制作对数坐标的剂量-效应曲线，并计算出的R2，以此来评价每块板的线性结果。
上海劲马在免疫学检测中，酶标板的检测性和保证酶标板性的浓度范围，是决定使用哪种酶标板品牌的非常重要因素。本实验采用商业化的ELISA实验方法来分析比较11种不同品牌的酶标板的性和线性范围。实验证明在所有测试的酶标板中，NuncMaxiSorp酶标板具有zui广的线性范围（4-2000pg待测蛋白/mL）。MaxiSorp酶标板也显示出了良好的重复性，另外100%的MaxiSorp酶标板的R2超过0.99，因此它在所有测试的不同品牌的酶标板中具有zui的结果。
缩写BSA：牛血清白蛋白ELISA：酶联免疫吸附测定HRP：辣根过氧化物酶O.D.：吸光值PBS：磷酸盐缓冲液TNF-alpha：人肿瘤坏死因子a
在定量实验中例如酶联免疫吸附测定（ELISA），不仅了解待测试剂的zui小浓度是非常重要的，而且酶标板的性及保持测试性的浓度范围也同样重要。酶联免疫吸附测定（ELISA）中常使用一次性多孔板，而聚苯乙烯板的特性可能改变试剂与固象部分的结合方式。这也反过来影响酶标板在不同反应物浓度时的性。保证酶标板准确度的浓度范围（线性范围）和线性曲线的重复性，是客户选择酶标板品牌着重考虑的因素。下面的酶联免疫吸附测定（ELISA）实验中，我们考察了NuncMaxisorp和其它竞争品牌酶标板的准确性和线性范围。
实验方法用商业化ELISA试剂盒中的稀释液来准备包被试剂：将0.1ml的捕获抗体溶液（稀释至4μg/mL）加入酶标板的每孔中，密封酶标板，室温下放置过夜。重复洗酶标板3次，每个孔中加入0.3mL封闭液（10g/L溶于PBS的牛血清白蛋白溶液），抚育一小时，重复上述冲洗步骤。用稀释液将人肿瘤坏死因子a以1：2梯度稀释，浓度从2000pg/mL到2pg/mL。灵敏度测试用来考察每个品牌的zui小可检测浓度。人肿瘤坏死因子a浓度。加0.1mL的人肿瘤坏死因子a至每个孔中，室温下抚育2小时。重复上述冲洗步骤，加0.1mL抗体（稀释到250ng/mL）至每个孔中，室温下抚育2小时。重复上述冲洗步骤，加入0.1mL的辣根过氧化酶-链霉亲和素溶液（1:200稀释）至每孔中，室温下抚育20分钟。经过zui后一次冲洗后，每孔加入0.1mL的显色剂，反应20分钟后立即加入0.05mL的终止液。要控制显色反应时间，以保持每个酶标板的一致性。用分光光度计读取每块酶标板在波长492nm下的吸光值，间隔5nm，100ms延时，300ms测试时间。检测阈值的计算方式为整板的空白孔（不加人肿瘤坏死因子a）的平均OD值加上两倍的标准偏差。以检测到超过阈值吸光度所对应的zui小抗原浓度来评价酶标板的灵敏度。通过线性范围测定来确定每块微孔板保持测量性的浓度范围。按以上步骤进行实验，所用的酶标板检测结果如表3所示，每一纵栏的吸光值（吸光值=测得的吸光值-空白孔吸光值），取重复孔平均值作为每板的数值。用Excel制作对数坐标的剂量-效应曲线，并计算出的R2，以此来评价每块板的线性结果。
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