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Elisa实验中牛奶样本收集方法
2015-4-13 阅读(1648)
Elisa实验中牛奶样本收集方法
ELISA技术的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。
牛奶和奶粉前处理方法
（a）牛奶前处理方法
┅┅取牛奶样本，3000g以上，10℃离心10min，吸除上层脂肪；
┅┅取5ml去除脂肪牛奶样本至10ml聚苯乙烯离心管中，加入150ulC液（见配液1）出现沉淀，振荡15s，再加入150ulD液（见配液2），振荡1min充分混合；
┅┅3000g以上，15℃离心10min，移取上层液；
┅┅用复溶工作液（见配液6）以等体积稀释上层液（1份上层液+1份复溶工作液）；
┅┅取50ul用于分析。
注：如果离心后仍然浑浊，再重复脱脂过程。
（b）牛奶前处理方法
┅┅取牛奶样本,3000g以上,10℃离心10min,吸除上层脂肪；
┅┅取5ml去除脂肪牛奶样本至10ml聚苯乙烯离心管中，加入250ulC液（见配液1）和250ulD液（见配液2）充分混合，3000g以上，4～12℃离心10min。（如没有冷冻离心机，请预先将样本冷却到8℃再进行离心）；
┅┅移取2.2ml上层液（相当于2ml奶样）至另一个10ml聚苯乙烯离心管中，加入4ml乙酸乙酯上下振荡10min；
┅┅3000g以上，室温（20-25℃）离心10min ；
┅┅移取2ml乙酸乙酯上层有机相（相当于1ml奶样），至10ml干净的玻璃试管中，于50～60℃水浴氮气流下吹干；
┅┅加入0.5ml复溶工作液（见配液6），涡动2min溶解干燥的残留物；
┅┅取50ul用于分析。
由于阴性样本可能会产生背景干扰 （在某些情况下干扰数值在标准2到3之间），所以推荐0.15ppb作为阳性结果的cut off判断值。
