大提柱式植物RNAout

大提柱式植物RNAout
产品及特点 本产品是天泽基因柱式植物RNAOUT（CAT#:71203）的大提升级产品，它结合了植物RNAOUT的性（其效果在近五十多种各类植物中得到验证，植物名单见植物RNAOUT产品介绍的附录）和天泽基因柱式纯化系列产品的快捷性。该产品特点如下：
1. 样品处理量大，一次可以处理5g的植物材料。
2. 操作简单快速，处理一个样品只需要约二十分钟。
3. RNA纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
4. 产量高（具体根据材料不同而不同）。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
规格及成分 成 份 5次包装
溶液A 100 mL
溶液B 30 mL
溶液C 100 mL
大提离心吸附柱 5套
通用洗柱液 100 mL
RNA洗脱液 5 mL
使用手册 1份

运输及保存 常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂 氯仿。
使用方法 1. 估算组织细胞的用量。每次大量提取一般需要3-5g植物叶片、或1-3g植物种子、或5-10g植物果实。
2. 先将新鲜植物*切成小块（保存在RNALOCKER中的植物组织需用纸吸去RNALOCKER液体后再剪切成小块），放入50mL塑料离心管中，加入20mL溶液A，然后用匀浆器匀浆。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎植物组织，但为避免氧化，砚磨时必须将组织浸泡在溶液A中进行，不能只在液氮中砚磨，然后再将砚磨物转移至干净的50 mL塑料离心管中。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀*溶解并充分摇匀后再取用。
3. 在离心管中加入5 mL的溶液B和5 mL自备氯仿，在振荡器上充分振荡1-3分钟，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4. 室温12000-15000 g离心3-5分钟，水相和有机相之间将有较厚的细胞破碎物。
5. 将上清液转移到另一干净的50mL塑料离心管中。下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。留下少量上清液不取。
6. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
7. 将一半的溶液转移到大提离心吸附柱中，13000-15000 g室温离心3-5分钟，弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液转移到同一大提离心吸附柱中， 13000-15000 g室温离心3-5分钟，弃穿透液。
9. 加10 mL通用洗柱液，室温离心3-5分钟，弃穿透液。
10. 重复上步一次，加10 mL通用洗柱液，室温离心3-5分钟，弃穿透液。
11. 室温离心1-3分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12. 将大提离心吸附柱转移到一个自备的RNase-free收集管中，加入0.5 mL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13. 13000-15000 g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品。
14. 再加入0.5 mL RNA洗脱液，重复上面两步一次。
15. 将两次洗脱得到的RNA立即使用或存放于-80℃待用
16. RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
17. RNA产量产率测定：将5-10 μL RNA溶于TE缓冲液中（pH7.5-8.2之间）检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积）和产率（RNA产量/组织用量）。
18. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间（具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关），高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。