探针浓度对原位杂交反应速度的影响

    探针浓度
    探针浓度的高低将影响杂交反应的速度。探针浓度低杂交反应进行得缓慢，反之则进行得快。在原位杂交反应中，探针浓度远比组织中靶核酸浓度要高。zui适宜的探针浓度应能获得zui强的杂交信号和zui低的背景。探针在不同组织上，ELISA试剂盒或在用不同方法制备的标本上弥散和穿透情况不同，因而所需要的zui适宜浓度可能也有差别。zui适宜的探针浓度要通过预实验确定，一般为0．5～5.0ug／ml，通常建议放射性核素探针浓度为0．5ug／ml，非放射性探针为2ug／ml。此外，杂交液的量也要适当，一般以每张切片10～20ul为宜。杂交液过多不仅造成浪费，而且过量的杂交液含核酸探针浓度过高，反而导致高背景染色等不良反应。
   

    杂交温度和时间
    杂交温度应低于杂交体的熔解或解链温度(Tm)20―30℃，大约在30～60℃之间，因为在上述温度条件下进行杂交反应，杂交率zui高。在实际操作中，杂交温度的选择是：当杂交液中的甲酰胺浓度为50％，盐浓度为0．75mol／L时，DNA探针的杂交温度为42℃左右，RNA探针杂交温度为50～55℃，寡核苷酸探针的杂交温度为37℃左右。在实验中需要根据具体情况摸索*杂交温度。ELISA试剂盒

    杂交反应时间可能随探针浓度的增加而缩短，但在一个相当大的浓度范围内，杂交反应在4―6小时内完成。在实际操作中，一般将杂交时间定为16～20小时，或为了方便，将杂交液和标本孵育过夜。然而，杂交反应时间不要超过24小时，反应时间过长，形成的杂交体会解链，杂交信号反而会减弱。

英文名称 Rattus norvegicus (Rat) 白介素9(IL9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格： 48T/96T
英文名称 Rhesus monkey (Simian) 白介素9(IL9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格： 48T/96T
英文名称 Rattus norvegicus (Rat) 白介素8受体β(IL8Rβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格： 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 白介素8受体β(IL8Rβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格： 48T/96T
英文名称 Mus musculus (Mouse) 白介素8受体β(IL8Rβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格： 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 白介素8受体α(IL8Rα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格： 48T/96T
英文名称 Mus musculus (Mouse) 白介素8受体α(IL8Rα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格： 48T/96T
英文名称 Oryctolagus cuniculus (Rabbit) 白介素8受体α(IL8Rα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格： 48T/96T
ELISA试剂盒英文名称 Rattus norvegicus (Rat) 白介素8受体α(IL8Rα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格： 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 白介素8(IL8)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格： 48T/96T
英文名称 Sus scrofa; Porcine (Pig) 白介素8(IL8)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格： 48T/96T