1.促生长凶子体外培养细胞除需要上述营养成分外,同样需要促进细胞生长的激素类物质,尤其是促细胞生长因子。如胰岛素能促使细胞利用葡萄糖和氨基酸,有促进有丝分裂作用,对很多细胞的增殖生长均有促进作用。*对皮肤上皮细胞及乳腺上皮细胞增殖生长有很好的促进作用,还能提高神经胶质细胞和成纤维细胞的克隆形成率。血清中宙有多种促细胞生长的因子,是体外培养细胞所需生长因子的重要来源。
血清中含有A、B、C、D四种因子。A因子能促进细胞早期生长,缩短潜伏期,清除细胞内脂肪滴。A因子比较小,呈酸性,可很快地通过火棉胶膜。B因子是…种脂肪形成剂。易使细胞产生脂肪滴,其本身是可溶性脂类,但不能通过火棉胶膜。B阂子在老年血清中含量较多,过滤可除去该因子。c因子可使细胞发生退化。D园子可促使细胞粘连,是一种黏着因子。若使B、C因子除去,则可促进细胞生长。血清中的球蛋白及肽对细胞有刺激性生长的作用,自蛋白不仅具有解除某些毒性物质(如油酸和重金属离子)对细胞的毒性作用.而且能支持细胞的生长和增殖。
血清对体外培养细胞固然重要,但有不少因素可影响血清的作用,如供血者的年龄、血型、血色素、*、脂肪酸等。年龄较老动物的血清对细胞生长有抑制作用.其抑制成分存在于血清的类脂质与蛋白质部分,并能耐热至65℃。随着年龄的增加,血清*含量下降,而类脂质、蛋白质与抑制剂的浓度增加(B因子也随之增加),对细胞生长不利;一般认为AB型血清比A型和O型血清对细胞生长有利,原因不清;低浓度的血色素可引起正常与恶性的鼠成纤维细胞的增殖,而高浓度血色素可产生抑制作用,因此在制备血清时,必须尽量避免溶血;低浓度*一般对细胞生长影响不大,对有的细胞有抑制作用,在选血清时,也应注意这个问题;血清中脂肪酸的含量对细胞生长有很大的影响,老年动物血清中脂肪酸的含量较高,雌性动物血清中脂肪酸的含量较雄性高,因此制备血清时应选择雄性幼年动物。
血清在培养液中的浓度并非越高越好。原则上是能达到维持细胞良好的生长和繁殖,又不浪费。一般常用的比例是10%、20%和40%,随各类细胞的需求而定。有时为了某种研究目的的需要,用无血清或低浓度(5%)血清培养。
由于生物工程技术方法的开发和进步,现已从血清、各种组织和其他生物成分中制取出多种促细胞生长物。