五聚体(ProImmune)结合胞内细胞因子染色在国外正在成为很多实验室的常规实验。五聚体可用于检测和分离少至淋巴细胞0.02%的抗原特异性CD8+T细胞群。然而，并不是所有的抗原特异性T细胞都具有功能，功能性细胞的比例因个体和疾病不同而异。可以通过对另外的胞内细胞因子联合染色来研究抗原特异性T细胞的免疫效应功能。
细胞因子的产生对免疫反应起着重要的作用。细胞因子作用的范例包括干扰素-γ（IFNγ）诱导产生的许多抗病毒蛋白、IL-2诱导产生的T细胞增殖、以及肿瘤坏死因子α（TNFα）对病毒基因表达和复制的抑制。细胞因子不是预先形成的，而是在受到相关刺激时才迅速产生和分泌的。因此，胞内细胞因子的染色依赖于在蛋白转运抑制剂存在的情况下（以将细胞因子截留在细胞内）对细胞的刺激。
激起细胞因子产生的细胞活化一般会导致T细胞受体的下调。因此，如果需要同时检测T细胞特异性，则应在细胞活化前进行Pro5R五聚体染色以确保染色水平。在此期间五聚体可能会与T细胞受体一同被内化，但仍可以在透化细胞内检测到。研究抗原特异性T细胞的效应功能时，先将细胞以五聚体染色，然后再用抗原刺激，随后用针对细胞外表位（如CD8）的特异性抗体进行染色，zui后再进行膜透化和胞内细胞因子染色。
Pro5R五聚体的胞内细胞因子染色使研究者能够测定对一个抗原刺激产生功能性应答的抗原特异性CD8+T细胞的比例。这在对特定免疫应答的监测和对不同疾病的反应之基本差异的了解方面都有影响意义。
