细胞培养的条件和要求

细胞培养的条件和要求
1.所有与细胞接触的设备、器材和溶液等，都必须保持无菌，避免细胞外微生物的污染。
目前zui可靠和zui常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。
如：玻璃制品、布类、金属制品：6.8kg20min。
橡胶制品：3.6～4.5kg10min。
培养用液，如Hanks液，水解乳蛋白：3.6～ 4.5kg10min。
实验中染菌物品和动物尸体等：6.8 kg20min。

试管、吸管等，则可采用干热灭菌；
一切不适于加热灭菌的液体，如人工合成培养液、小牛血清、*等溶液，可采用过滤法除菌。

细胞培养中常用的消毒剂浓度及其使用场合

2.必须有足够的营养供应，而不可有有害的物质，包括极微量的有害离子的掺入，为此必须注意器材的清洗和配液用水的质量。

细胞培养中对水的质量要求很高（见水处理）。

3.保证有适量的氧气供应。

细胞代谢需要有空气，否则细胞死亡。在用培养瓶进行静止培养，或用转瓶进行旋转培养时，只要培养的液体量不超过总容量的30％，通过与液面的空气交换，可以保证细胞有足够的氧气。当用罐子深层培养时，则必须通气，一般采用含5％CO2的空气，或根据需要将CO2、N2、O2和空气以不同比例混合，过量氧对细胞的生长也不利。

4.需随时清除细胞代谢中产生的有害产物。

细胞在代谢过程中会产生大量代谢废物，如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等，这些产物对细胞的生存有害，必须及时清除。在小量培养时，当培养基中酚红指示剂显示黄色，表示已有相当量乳酸产生，要及时更换新鲜的培养基。在大量培养时，则需随时测定葡萄糖和乳酸等含量，并调节灌流速度，使代谢产物保持在无害水平下。

5.有良好的适于其生存的外界环境，包括温度、pH、渗透压和离子浓度等。

不同的细胞对pH的要求不同，一般来说适于细胞生长的pH在6.8～7.4，过高或过低均不利于细胞生长。如上所述，细胞在代谢过程中会产生大量乳酸，使培养的pH下降。为了保持培养液的pH，常在培养液内加入各种缓冲系统，如Na2HPO4/Na2HPO4、NaHCO3/H2CO3（CO2）、Tricineglycine，以及加缓冲剂Hepes液（常用浓度为10～50mol/L）.

6.及时分种，保持合适的细胞密度