199．苏州华宇净化工作台在山楂叶·果和籽提取液抗氧化性研究中的应用

1．1 材料与试剂山楂叶、果和籽：采于连云港中云乡，自然晾干，粉碎，过40目筛。芦丁（中国药品生物制品鉴定所）；无水乙醇、硝酸钠、硝酸铝、硫酸、氢氧化钠均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）；氯化钠分析纯（南京化学试剂有限公司）；磷酸钠、钼酸铵、BHT均为分析纯（上海试验试剂有限公司）。1．2仪器设备DJ讲移液枪（大龙医疗设备有限公司）；BS．124S电子分析天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]；UV-722S分光光度计（上海棱光技术有限公司）；DK一$24型电热恒温水浴锅（上海精宏试验设备有限公司）；SW-CJ一1F洁净工作台（苏州市华宇净化设备有限公司）；LS．B50L立式压力蒸汽灭菌器（上海华线医用核子仪器公司）。

1．3试验方法

1．3．1 山楂叶、果和籽提取液的制备。分别取一定量山楂叶、果和籽粉末样品，以70％乙醇作为浸提溶剂在85℃恒温水浴下浸提2 h，过滤，得到相应提取液。

1．3．2 山楂叶、果、籽提取液中总黄酮含量的测定【8 J。1．3．2．1 标准曲线的绘制。称取5 mg芦丁对照品，用60％乙醇溶解转移至50 rnl容霞瓶中。定容，得到10 ms／ml 的芦丁标准品乙醇溶液。分别准确移取0、l、2⋯3 4 5 ml上述溶液于10 I【ll容量瓶中，加入0．3 ml 10％硝酸钠溶液，摇匀，放置6 min，加入0．3 ml 10％硝酸铝溶液，摇匀，放置6min，加入4 ml 1 mol／L氢氧化钠溶液，分别用60％乙醇定容，摇匀，放置15 min，以l号容量瓶中溶液为空白，在波长510 nm处测定吸光度。

1．3．2．2总黄酮含量的测定。采用硝酸铝比色法。将山楂叶、果和粉末提取液在波长510姗处测得吸光度，用标准曲线回归方程计算得到提取液中总黄酮含量。

1．3．3 山楂叶、果和籽提取液的处理。先将6个大药瓶高压蒸汽灭菌，再将20 rnl山楂叶、果和籽提取液分别装入6个无菌大药瓶中（每种各放2个无菌大药瓶），由于黄酮不耐高温高压，因此采用巴氏消毒与间歇灭菌相结合的方法进行灭菌。将6个装有提取液的大药瓶置于水浴锅中，80℃灭菌15 s，再取出药瓶，置于37℃培养箱中保温过夜，第2天再进行1次巴氏消毒。重复3次。

1．3．4抗氧化活性测定一J。采用磷钼络合物法。分别配制与山楂叶、果和籽提取液中总黄酮含量相同的BHT溶液作为对照组溶液BHT，、BHT2、BH％，进行测定。在lO IIll具塞

刻度比色管中各加入1．0 ml已灭菌山楂叶提取液、1．0 ml同浓度的BHT及1．0 ml山楂叶提取液与同浓度BHT的混合物，每管均加入1．O lnl 0．6 mol／L心S04溶液，1．0 Inl 0．028mol／L Na_3P04溶液，1．0 m10．004 tool／L（NH4）6M07024溶液，加入蒸馏水定容至5．O Illl，摇匀，置95℃水浴中加热反应O一150 min，每30 min取出1支，冷至室温，测定波长695 nm。。处的吸光度，空白对照用1．0 rnl 70％乙醇做同样的处理。山楂果和籽的测定方法同上，所有测定平行进行3次，取其平均值。根据吸光度大小可比较山楂叶、果和籽提取液与BHT的抗氧化能力。