小鼠巨噬细胞Ana-1细胞

小鼠巨噬细胞Ana-1细胞
生长特性： 悬浮生长   
培养条件 ：RPMI 1640 (w/o Hepes)  胎牛血清，10%
传代方法：1:2。3天内可长满。
传代情况 ：PN
冻存条件：基础培养基+8%DMSO+20%FBS

小鼠巨噬细胞Ana-1细胞细胞复苏：
1、打开水浴锅, 预热到37度
2、从液氮罐中出冻存的细胞，迅速放入37度水浴锅快速溶解
3、在超净台中，把溶解的细胞移入离心管，（离心管内先加入２ＭＬ左右的培养基）．１０００ＲＰＭ 离心５分钟
4、弃上清，加入１ＭＬ培养基，吹打均匀，移入培养瓶内，（培养瓶内先加入４－５ＭＬ培养基），３７度过５％ＣＯ２培养箱培养
5、第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。

小鼠巨噬细胞Ana-1细胞细胞传代：
1、当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代；
2、37°C水浴预热培养基；
3、在超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS清洗细胞后，再加入1ml胰酶消化细胞；
4、显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml培养基终止消化；
5、用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；
6、将细胞移入离心管中，1000rpm离心5min；
7、弃上清，加入15-20ml的培养基（含血清）重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶），混匀细胞悬液，确保细胞均匀分布；
8、将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养。

细胞冻存：
1、将细胞消化下来，移入离心管离心，弃上清
2、准备冻存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培养基＋１０％ＤＭＳＯ（现用现配） 或95％ＦＢＳ＋5％ＤＭＳＯ（现用现配）
3、加1.5毫升冻存液在离心管中，将细胞吹打均匀，移入冻存管内．
冻存时间。放入4度冰箱10分钟.  放入-20度冰箱1－3小时后．再放入-80度冰箱过夜，第二天放入液氮罐保存
4、原则：慢冻速溶
5、加1.5毫升冻存液在离心管中，将细胞吹打均匀，移入冻存管内。

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