贴壁细胞处理方法

• 细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满*培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。从细胞资源中心获得细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。

二、 镜下观察：

未超过80%汇合度时，将瓶装的*培养液移入无菌瓶中，留待日后培养用，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培养液，放入37℃、5%CO2孵箱培养；

超过80%汇合度时，按要求比例消化传代。

三、消化方法

1、将瓶装的*培养液移入无菌瓶中，留待日后培养用。加消化液0.25% Trypsin-EDTA (1X), Phenol Red消化。

2、T25瓶加3ml PBS，洗一次，弃上清，再加1ml消化液消化，显微镜下观察，等细胞*脱离瓶壁分离成单个后，加培养基混匀，离心收集，按要求分瓶（视细胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6， 1:6-1:8），每T25瓶加培养基至6-8ml，37℃、5%CO2孵箱培养

四、若客户收到2ml小管细胞

收到细胞以后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超菌台内，严格无菌操作；然后将小管细胞转移至T25培养瓶，加入9ml左右含FBS的培养基混匀，放入培养箱过一夜培养后查看细胞汇合度：若未超过80%汇合度，换液继续培养，据情况传代或者冻存。若超过80%汇合度，可直接进行传代（方法同上）

    该细胞使用培养基：1、DMEM(高糖)    2、R1640    3、R1640（改良）4、MEM(EBSS)    5、MEM(NEAA)    6、D/F12    7、F12    8、F12K    9、MaCcoy‘    10、L15    

血清要求：1、20%FBS    2、15%FBS    3、10%FBS    4、5%FBS    5、2.5%FBS    6、15%HS    7、10%HS    8、5%HS    9、2.5%HS    10、10%CCF(灭活)

四、细胞代数：      复苏人：     

冻存液：常规培养液+20%FBS+8%DMSO

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