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羟基磷灰石填料——纯化蛋白、多肽、核酸
分离机理:羟基磷灰石具有*的分离机理,是*直接用于蛋白质和核酸纯化的无机层析填料,高度耐碱,生物安全性zui高。其中磷酸离子与带正电的蛋白质以离子键结合,具有离子交换特性,可由NaCl浓度梯度或磷酸钠浓度梯度洗脱,其中的Ca2+离子与带负电蛋白质的自由羧基以金属螯合方式结合,该结合方式对NaCl不敏感,可由磷酸钠浓度梯度洗脱。因此该填料既可以用磷酸钠单梯度洗脱,也可以采用NaCl梯度洗脱后以低浓度磷酸钠缓冲液平衡,再以磷酸钠浓度梯度洗脱的双梯度洗脱模型,以达到更高的分辨率。
羟基磷灰石类型选择:羟基磷灰石因陶瓷化工艺不同分为2种类型:I型和II型,I型对蛋白质具有更大的保留,对普通蛋白质具有更大的动态载量,主要纯化大部分蛋白质(分子量一般在100kd一下);II型由于孔径较I型大,因而对抗体和部分重组疫苗等大分子量蛋白质的动态载量更高,而对HSA几乎无保留,因而更适合于抗体的纯化,同时II型对核酸具有更大的保留,能够分辩单、双链、超螺旋等各种结构的DNA,因而也适合纯化核酸。
●高动态载量、高流速、高产率
●更好的化学稳定性和机械强度,更长的寿命
●刚性结构,保证了其在PH>6.5的范围内使用,可用NaOH清洗
●良好的批次重现性,容易放大化
●可随意选用阳离子和金属螯合两个模式分离纯化蛋白或其他分子
●能用于层析系统、重力流柱、AcroPrep多孔板等
应用
●碱性蛋白的纯化(免疫球蛋白)
●抗体纯化
●酸性蛋白(白蛋白)
●去除DNA和内毒素
●纯化磷多肽
●分离纯化复杂的蛋白混合物
●纯化质粒
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