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南京金益柏生物科技有限公司
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细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。它在生物体的进化、内环境的稳定以及多个系统的
流 式 法
一、服务介绍
细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。它在生物体的进化、内环境的稳定以及多个系统的发育中起着重要的作用。细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型，而且具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学机制。凋亡是多基因严格控制的过程。
二、实验原理
Annexin V/PI双染检测细胞凋亡：在正常细胞中，磷脂酰*（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰*（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰*有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰*与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
三、实验流程
1.细胞培养，接种6孔板；
2.按的方式诱导细胞凋亡；
3.不含EDTA的*消化贴壁细胞并离心收集；
4.重悬细胞，加Annexin V/PI染色；
5.流式细胞仪检测；
6.结果统计分析。
四、服务说明
1.客户提供：培养好的细胞以及所需药品
2.公司提供：基本实验步骤、流式图片、数据分析结果、剩余药品。
3.实验周期: 1-2周左右，具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。
TUNEL法
二、实验原理
TUNEL法（terminal dexynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定法），也称DNA断裂的原位末端标记法。细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的分阶段的过程，染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300 kb的大片段，然后大约30%的染色体DNA在Ca2+和Mg2+依赖的核酸内切酶作用下，在核小体单位之间被随机切断，形成180～200 bp核小体DNA多聚体。DNA双链断裂或只要一条链上出现缺口而产生的一系列DNA的3’-OH末端可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸化酶或*形成的衍生物标记到DNA的3’-末端，再用辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素与衍生物上*结合（每个链霉亲和素至少可以再结合3个*分子），zui后用DAB、过氧化氢与辣根过氧化物酶发生氧化、环化反应，形成苯乙肼聚合物而呈现棕褐色，zui终通过计数每张切片上不同视野中TUNEL阳性细胞的比例来判断细胞凋亡发生情况。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3’-OH形成，很少能够被染色。
三、实验流程
1.收集处理后的细胞或石蜡切片脱蜡至水。
2.过氧化氢甲醇中浸洗，抑制内源性过氧化氢酶。
3.用蛋白酶K室温孵育15~30分钟。
4.滴加TUNEL反应混合液（即配即用，4oC避光），孵育60分钟，在荧光镜下（绿色）分析结果。
5.加入转化剂-POD，孵育20~30 min。
6.加入DAB底物溶液，孵育5~10 min。
8.中性树胶或者甘油封片，光镜下分析结果。
四、服务说明
1.客户提供：培养好的细胞以及所需药品；或者提供石蜡标本
2.公司提供：基本实验步骤、图片、数据分析结果、剩余药品
3.实验周期: 2-3周左右，具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。
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