FITC|FAM|FAM SE|CFDA|TAMRA荧光试剂及衍生物

荧光试剂 fluorescence reagent 一种有机试剂，能与荧光较弱或不显荧光的物质共价或非共价结合形成荧光的配合物。如8-羟基喹啉、黄酮醇、石榴茜素R、桑色素等。在它们的分子中大多含有芳香环或杂环。主要用于无机元素的荧光测定，例如，铍、铝、硼、镓、硒、镁以及某些稀土元素。对有机化合物也能对它们所发的荧光起加强、稳定和提高选择性的作用。

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（1）FITC

纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。有两种异构体，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性与蛋白质结合力等方面都更优良。FITC分子量为389.4，zui大吸收光波长为490～495nm，zui大发射光波长为525～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用zui广泛的荧光素。其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。

FITC能和各种抗体蛋白结合，结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性，并在碱性溶液中具有强烈的黄绿色荧光。通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。用于医学，农学和畜牧等方面，可对由细菌病毒和寄生虫等所致疾病进行快速诊断。

FITC 是在荧光素的基础上通过化学反应增加硫氰酸基团得到的，硫氰酸基团可以和生物活性物质例如蛋白质上的伯胺基团反应形成硫脲键，从而实现对生物活性物质的荧光标记。

利用荧光素对蛋白质进行标记。它的主要原理是利用FITC(异硫氰酸荧光素)上的N=C=S基团和蛋白质上游离的-NH2发生化学反应，而后在特定波长光源的激发下即可观测到荧光信号。

（2）FAM

羧基荧光素，Carboxyfluorescein，是荧光素衍生物的一种，与FITC相比，FAM与氨基反应更快，产物也更稳定，但FITC结合蛋白的量更大且进程更易于控制。FAM也适用Argon-ion Laser的488nm光谱线，Abs/Em=492/518nm（pH=9.0），具有荧光素衍生物的普遍特性，在水中稳定。5-FAM主要应用于DNA自动测序中，标记其中的d/ddCTP，也经常用于PCR产物定量，核酸探针等。

（3）FAM SE

由FAM酸与琥珀酸亚胺反应得到，它是zui普遍的用来标记肽，蛋白质及核酸的绿色荧光试剂之一，同时也可用于配制各种小荧光分子。羧基荧光素（通常称为FAM）和其胺反应琥珀酸亚胺酸在生物交联剂中比FITC更受青睐。FAM SE能提供更耐水解的甲酰胺。另外，FAM SE所要求的交联环境没其他试剂严格，并能提供更好的共轭产率，所得到的交联结果更稳定。FITC标签核酸和肽比相应的FAM交联物变性速度更快。在大多数生物应用方面FAM SE试剂均可替代FITC试剂。

（4）CFDA

CFDA酯化荧光素衍生物,具有细胞渗透性，通过胞内非特异性脂酶水解成羰基荧光素CF。与传统的荧光素不同，CF带有特殊的负电荷，能延长其在细胞内的存留时间，它在检测细菌内部脂酶活性方面有着广泛的应用。

（5）TAMRA

TAMRA是在用的多种不同共轭物中的荧光试剂之一，可标记蛋白质和寡核苷酸。TAMRA具有吸光的性质，它的光谱与几类常用的荧光化合物重叠，TMR是明亮的橙色荧光基团。经常用于淬灭基团的标记。 5-(6）-TAMRA是由两个不同羧基TMR单体形成的混合物 。它用来修饰氨基和羧基基团，通过EDC介导的偶联作用。它能够与胺反应衍生形成5（6）-TAMRA SE。TAMRA具有更强的光稳定性、更高的荧光产量和更低的pH敏感性。